江蘇蛋白質(zhì)棕櫚酰化修飾組學(xué)分析方法

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2022-03-25

蛋白質(zhì)翻譯后修飾在蛋白質(zhì)中磷酸化位點(diǎn)分析時(shí)應(yīng)該注意些什么問(wèn)題?覆蓋率:覆蓋率越高,檢測(cè)和鑒定含有修飾基團(tuán)的肽幾率就越大。修飾位點(diǎn)的占有率:被修飾的蛋白質(zhì)的百分比低,則檢測(cè)到修飾肽的機(jī)會(huì)會(huì)隨之減少。如果百分比較高(> 30%),則有助于識(shí)別修飾位點(diǎn)。棕櫚?;鞍仔揎椯|(zhì)譜鑒定方法:S-棕櫚酰化的主要功能是促進(jìn)蛋白質(zhì)與細(xì)胞膜的結(jié)合。蛋白質(zhì)可以由一個(gè)棕櫚酰基組成,也可以與更多棕櫚基或與其他脂質(zhì),如豆蔻?;S捎趯?duì)S-棕櫚?;鞍追治鋈匀痪哂刑魬?zhàn)性,由于S-棕櫚?;揎椀鞍讈喫揭约笆杷院蜐撛诓环€(wěn)定的硫代質(zhì)鏈的S-脂?;摹,F(xiàn)在常用的幾種方法可以捕獲S-脂酰化蛋白以及對(duì)目標(biāo)修飾蛋白進(jìn)行捕獲。蛋白質(zhì)糖基化指碳水化合物通過(guò)共翻譯或翻譯后修飾的方式附著到蛋白質(zhì)上的過(guò)程。江蘇蛋白質(zhì)棕櫚?;揎椊M學(xué)分析方法

翻譯后修飾蛋白組學(xué)分析:在蛋白翻譯后修飾方式的鑒定過(guò)程中,蛋白會(huì)首先被酶切成肽段,然后進(jìn)入質(zhì)譜進(jìn)行分析。通過(guò)質(zhì)譜分析,得到的是一系列肽段的分子質(zhì)量信息。對(duì)于某一個(gè)特定肽段而言,在沒(méi)有發(fā)生任何翻譯后修飾的情況下,其序列信息和分子量是確定的。當(dāng)它發(fā)生了某種翻譯后修飾之后,例如磷酸化修飾,由于序列信息和分子量是確定的,磷酸根的分子量也是確定的。在質(zhì)譜檢測(cè)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)其中的部分肽段的分子量剛好增加了一個(gè)磷酸根的分子量,假設(shè)這個(gè)肽段就發(fā)生了磷酸化修飾,再通過(guò)二級(jí)質(zhì)譜圖進(jìn)行二次確認(rèn)。江蘇蛋白質(zhì)棕櫚?;揎椊M學(xué)分析方法質(zhì)譜是蛋白質(zhì)翻譯后修飾檢測(cè)的常用技術(shù)之一。

蛋白質(zhì)磷酸化修飾組學(xué):蛋白質(zhì)的磷酸化修飾是生物體內(nèi)重要的共價(jià)修飾方式之一。磷酸化修飾本身所具有的簡(jiǎn)單、靈活、可逆的特性,以及磷酸基團(tuán)的供體ATP的易得性,使得磷酸化修飾被真核細(xì)胞所選擇接受成為一種比較普遍的調(diào)控手段。蛋白質(zhì)的磷酸化和去磷酸化這一可逆過(guò)程,幾乎調(diào)節(jié)著包括細(xì)胞的增殖、發(fā)育、分化、細(xì)胞骨架調(diào)控、細(xì)胞凋亡、神經(jīng)活動(dòng)、肌肉收縮、新陳代謝發(fā)生等生命活動(dòng)的所有過(guò)程,并且可逆的蛋白質(zhì)磷酸化是目前所知道的比較主要的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)方式。目前已經(jīng)知道有許多人類疾病是由于異常的磷酸化修飾所引起,而有些磷酸化修飾卻是某種疾病所導(dǎo)致的后果。

質(zhì)譜分析乙?;鞍踪|(zhì)組:質(zhì)譜分析技術(shù)可以對(duì)蛋白質(zhì)組中的乙?;鞍走M(jìn)行鑒定、乙酰化位點(diǎn)定位以及定量。當(dāng)質(zhì)譜用于乙?;康鞍捉M研究中時(shí),因?yàn)橐阴;鞍踪|(zhì)在生物樣本中含量低、動(dòng)態(tài)范圍廣,需要先對(duì)乙?;亩芜M(jìn)行富集,然后再對(duì)富集得到的乙?;亩螛悠愤M(jìn)行定量分析。質(zhì)譜定量乙?;鞍捉M采用肽段預(yù)分離降低高豐度蛋白的影響,結(jié)合免疫共沉淀通過(guò)高效的抗體富集乙酰化的肽段,從而實(shí)現(xiàn)大規(guī)模乙?;蔫b定及定量。為了鑒定和定量更多的乙酰化肽段,在酶切過(guò)程中還可使用多種不同的酶對(duì)蛋白樣品進(jìn)行酶切。蛋白質(zhì)糖基化是一種常見(jiàn)的蛋白質(zhì)翻譯后修飾。

蛋白磷酸化修飾過(guò)程:蛋白磷酸化修飾這一過(guò)程是通過(guò)蛋白激酶催化,將磷酸基團(tuán)從ATP轉(zhuǎn)移到多肽底物的絲氨酸、蘇氨酸,或酪氨酸殘基上。并且磷酸化修飾的過(guò)程是可逆的,去磷酸化反應(yīng)由蛋白磷酸酶催化完成。蛋白磷酸化檢測(cè)方法:Western Blot檢測(cè)方法:Western Blot是檢測(cè)蛋白磷酸化水平的常用方法,主要過(guò)程為先利用SDS-PAGE分離蛋白質(zhì),隨后將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到PVDF膜上,然后使用特異性識(shí)別磷酸化蛋白的抗體來(lái)鑒定目標(biāo)蛋白的磷酸化水平。只有被磷酸化修飾的蛋白才會(huì)在相應(yīng)分子質(zhì)量的地方顯現(xiàn)特異性蛋白條帶。蛋白質(zhì)翻譯后修飾可以改變蛋白質(zhì)的物理、化學(xué)性質(zhì)。貴陽(yáng)亞硝基化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)有哪些類型

在蛋白翻譯后修飾方式的鑒定過(guò)程中,蛋白會(huì)首先被酶切成肽段,然后進(jìn)入質(zhì)譜進(jìn)行分析。江蘇蛋白質(zhì)棕櫚酰化修飾組學(xué)分析方法

蛋白翻譯后修飾組學(xué)技術(shù)在準(zhǔn)確醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用:盡管目前大數(shù)據(jù)的獲得會(huì)采用基因組學(xué)和轉(zhuǎn)錄組學(xué),但是關(guān)鍵的發(fā)現(xiàn)還是依賴蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)而得到的。近來(lái)越來(lái)越多的研究表明蛋白組學(xué)驅(qū)動(dòng)的準(zhǔn)確的醫(yī)學(xué)具有極大的實(shí)用性和普適性,蛋白組學(xué)的研究更加速了臨床轉(zhuǎn)化的進(jìn)程。蛋白翻譯后修飾(post-ranslational modification, PTM)賦予了蛋白種類的豐富性及蛋白功能的多樣化,研究蛋白翻譯后修飾不只可以確定蛋白修飾(磷酸化、泛素化、?;?、甲基化、SUMO化等)或蛋白酶裂解的新位點(diǎn),還可以發(fā)現(xiàn)生物標(biāo)記物及探索藥物/化學(xué)調(diào)節(jié)物的作用機(jī)制。江蘇蛋白質(zhì)棕櫚?;揎椊M學(xué)分析方法

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