蛋白質組學在醫(yī)療和健康方面有什么應用?基于質譜的蛋白質組學是目前比較主流的高通量蛋白質研究手段,當前在醫(yī)療健康方面的應用主要集中于基礎研究和轉化醫(yī)學。隨著質譜、系統生物學、生物信息學等相關學科的發(fā)展,我認為今后我們會更多地在現實生活中見到蛋白質組學相關的應用。如定量胰島素、鑒定血紅蛋白氨基酸突變(鐮刀形紅細胞癥)、糖化血紅蛋白比例測定等。從測試體量估計,應該遠小于1%的ELISA測試量。由于成本和通量等原因,蛋白質組學技術并不如ELISA適合大量的日常分析。但對于一些分析有問題的項目,采用基于質譜(或二維膠等手段)的蛋白質組學有獨特的技術優(yōu)勢。另外,蛋白質組學方法開發(fā)和驗證周期短,在中高級特殊應用(如極少使用的特殊蛋白指標臨床檢測、未知疾病研究和控制)中也有其獨特優(yōu)勢。蛋白質組研究技術在研究對象上,覆蓋了原核微生物、真核微生物、植物和動物等范圍。廣州常規(guī)蛋白質組學領域
蛋白組學樣本要求:常規(guī)組織:(心、肝、脾、肺、腎、腸、腦、肌肉等)PBS洗滌去除殘留血液和污染物,剔除無關的干擾組織(血管、脂肪、結締組織等);沖洗干凈,用組織剪或手術刀將組織分離成1cm3左右的小塊;液氮速凍5min,保存于-80℃。軟骨組織:PBS洗滌去除殘留血液和污染物;用手術刀將軟骨切成1cm3左右的小塊;液氮速凍5min,保存于-80℃。軟體動物(吸蟲等)PBS洗滌去除來自宿主的污染;液氮速凍5min,保存于-80℃。蛋白質組的研究不但能為生命活動規(guī)律提供物質基礎,也能為眾多種疾病機理的闡明及攻克提供理論根據和解決途徑。南京定量乙酰化蛋白質組學鑒定蛋白質組學研究不僅是探索生命奧秘的必須工作,也能為人類健康事業(yè)帶來巨大的利益。
蛋白質組學技術:等電聚焦:等電聚焦(isoelectricfocusing,IEF)是一種利用有pH梯度的介質分離等電點不同的蛋白質的電泳技術。等電聚焦凝膠電泳依據蛋白質分子的靜電荷或等電點進行分離,等電聚焦中,蛋白質分子在含有載體兩性電解質形成的一個連續(xù)而穩(wěn)定的線性pH梯度中電泳。載體兩性電解質是脂肪族多氨基多羧酸,在電場中形成正極為酸性,負極為堿性的連續(xù)的pH梯度。蛋白質分子在偏離其等電點的pH條件下帶有電荷,因此可以在電場中移動;當蛋白質遷移至其等電點位置時,其靜電荷數為零,在電場中不再移動,據此將蛋白質分離。
蛋白質組學:質譜分析蛋白質組學的基本原理主要是通過測定被測樣品離子的理化性質來進行分析,根據樣品的質量譜圖和相關信息從而得到定性和定量結果。目前,蛋白質組學質譜分析一般是根據保留時間(retentiontime)、質荷比(m/z)、離子強度(intensity)這三個維度對肽蛋白質進行鑒定和定量,即3D蛋白質組學。4D蛋白質組學在3D蛋白質組學的基礎之上增加了第四維度,離子淌度(mobility),主要根據離子的形狀和截面對離子進行分離,能夠區(qū)分m/z差值非常小的肽段,使低豐度蛋白信號能夠被區(qū)分和識別出來。4D蛋白質組學基于timsTOFPro質譜儀,結合PASEF(ParallelAccumulationSerialFragmentation,同步累積連續(xù)碎裂)與TIMS(TrappedIonMobilitySpectrometry,離子遷移譜),可重復測量所有檢測離子的碰撞截面(CCS),能更快、更靈敏的進行蛋白質組定性和定量。蛋白質組(Proteome)一詞,源于蛋白質(protein)與基因組(genome)兩個詞的組合。
蛋白質組學技術:生物質譜:生物質譜技術是蛋白質組學研究中比較重要的鑒定技術,其基本原理是樣品分子離子化后,根據不同離子之間的荷質比(M/E)的差異來分離并確定分子量。對于經過雙向電泳分離的目標蛋白質用胰蛋白酶酶解(水解Lys或Arg的-C端形成的肽鍵)成肽段,對這些肽段用質譜進行鑒定與分析。目前常用的質譜包括兩種:基質輔助激光解吸電離-飛行時間質譜(MALDI-TOF-MS)和電噴霧質譜(ESI-MS)。蛋白質組的研究不但能為生命活動規(guī)律提供物質基礎,也能為眾多種疾病機理的闡明及攻克提供理論根據和解決途徑。蛋白質組學技術有生物質譜。江蘇修飾蛋白組學
蛋白質組學技術有電噴霧質譜。廣州常規(guī)蛋白質組學領域
蛋白質組研究內容:1.蛋白質鑒定:可以利用一維電泳和二維電泳并結合Western等技術,利用蛋白質芯片和抗體芯片及免疫共沉淀等技術對蛋白質進行鑒定研究。2.翻譯后修飾:很多mRNA表達產生的蛋白質要經歷翻譯后修飾如磷酸化,糖基化,酶原刺激等。翻譯后修飾是蛋白質調節(jié)功能的重要方式,因此對蛋白質翻譯后修飾的研究對闡明蛋白質的功能具有重要作用?;?受體結合分析??梢岳没蚯贸头戳x技術分析基因表達產物-蛋白質的功能。另外對蛋白質表達出來后在細胞內的定位研究也在一定程度上有助于蛋白質功能的了解。廣州常規(guī)蛋白質組學領域
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