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蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用是蛋白質(zhì)發(fā)揮功能的主要機制之一,在DNA損傷修復(fù),自噬和代謝等過程中都扮演著非常重要的角色,蛋白相互作用異常便會導(dǎo)致疾病的發(fā)生.在蛋白質(zhì)的賴氨酸,絲氨酸和蘇氨酸等氨基酸殘基上,可發(fā)生甲基化,乙?;?磷酸化和泛素化等200多種翻譯后修飾,這些修飾通常能改變蛋白質(zhì)的電性,疏水性和空間結(jié)構(gòu)等屬性,為與之結(jié)合的蛋白提供結(jié)合的錨定或產(chǎn)生位阻效應(yīng),像一把開關(guān)在時空上精確調(diào)控蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的發(fā)生以及動態(tài)變化.結(jié)構(gòu)研究表明,蛋白質(zhì)之間的相互作用通常由臨近的幾個氨基酸殘基直接結(jié)合,替換該區(qū)域的氨基酸殘基,通常能破壞結(jié)合,使其失去部分功能或酶活性,可以針對性地開發(fā)和設(shè)計抑制劑,用于疾病的診療。常見的蛋白質(zhì)翻譯后修飾包括乙?;N錆h蛋白質(zhì)糖基化修飾組學(xué)費用
蛋白質(zhì)學(xué)組翻譯后修飾分析:組蛋白是一類高度保守的蛋白質(zhì),是染色質(zhì)的關(guān)鍵成分,是DNA包裝的結(jié)構(gòu)單位。組蛋白的功能受其翻譯后修飾介導(dǎo)。組蛋白翻譯后修飾包括通過絲氨酸或蘇氨酸殘基的磷酸化,賴氨酸或精氨酸的甲基化,賴氨酸的乙酰化和脫乙?;?,賴氨酸的泛素化和磺?;葘M蛋白進行的共價修飾。組蛋白這些修飾對于核完整性至關(guān)重要,因為它們可以調(diào)節(jié)染色質(zhì)結(jié)構(gòu)并募集參與基因調(diào)節(jié)、DNA修復(fù)和染色體濃縮的酶。組蛋白的翻譯后修飾大多位于N末端的尾巴上,因為N末端是蛋白質(zhì)中比較暴露和比較靈活的區(qū)域。分析組蛋白翻譯后修飾有助于探索組蛋白修飾與染色體濃縮、DNA轉(zhuǎn)錄等生物功能之間的關(guān)系。河南乙?;揎椀鞍踪|(zhì)組學(xué)質(zhì)譜分析質(zhì)譜是蛋白質(zhì)翻譯后修飾檢測的常用技術(shù)之一。
翻譯后修飾蛋白組分析:蛋白質(zhì)翻譯后修飾是影響蛋白質(zhì)功能并調(diào)節(jié)整個細胞過程的重要方式,幾乎在每個細胞過程中都是不可或缺的。分析和鑒定翻譯后修飾蛋白質(zhì)對揭示蛋白質(zhì)的功能和深入了解各種生理現(xiàn)象具有重要意義。大多數(shù)翻譯后修飾蛋白以低化學(xué)計量和豐度存在,這限制了在分析全細胞裂解液時對其的檢測。因此,要在蛋白質(zhì)組學(xué)的范圍內(nèi)表征翻譯后修飾蛋白,純化方法是必要的,以分離修飾蛋白和肽段,然后再進行后續(xù)分析。后續(xù)分析一般采用質(zhì)譜技術(shù)進行,可以對翻譯后修飾蛋白組進行定性和定量研究。
蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué):翻譯后修飾自下而上分析策略:自下而上蛋白質(zhì)組學(xué)是一種基于肽段分析的技術(shù)。對于不同類型的翻譯后修飾,具體的分析策略存在差異。蛋白質(zhì)的糖基化具有異質(zhì)性。不同的糖鏈可以連接到同一位點上,不同位點可以連接到同一蛋白質(zhì)上的不同糖鏈上。糖基化的異質(zhì)性嚴(yán)重阻礙了糖蛋白的分離和分析。不同糖類型的相同蛋白質(zhì),在電泳上會出現(xiàn)分散的條帶,導(dǎo)致信號分散。此外,對低豐度蛋白質(zhì)的識別性差導(dǎo)致糖蛋白在色譜圖中分離不佳,質(zhì)譜中有一簇分子量不準(zhǔn)確的分辨不清的峰。目前,蛋白糖基化研究的主要策略是利用現(xiàn)有的技術(shù)體系對糖基化蛋白的糖基化肽段進行分離和富集,消除糖基化的異質(zhì)性及其對質(zhì)譜的影響,標(biāo)記糖基化位點。在蛋白翻譯后修飾方式的鑒定過程中,蛋白會首先被酶切成肽段,然后進入質(zhì)譜進行分析。
蛋白質(zhì)磷酸化修飾定義?在哺乳動物細胞生命周期中,大約有1/3的蛋白質(zhì)發(fā)生過磷酸化修飾,在脊椎動物基因中,約有5%的基因編碼的蛋白質(zhì)是參與磷酸化和去磷酸化過程的蛋白激酶和磷酸酶。它可以通過激發(fā)、調(diào)節(jié)諸多信號通路進而參與調(diào)控生物體的生長、發(fā)育、逆境應(yīng)激、疾病發(fā)生等多種生命過程,一直是生物學(xué)研究的重點與熱點。蛋白磷酸化是指在激酶催化作用下把ATP或者GTP的磷酸基團(P04)轉(zhuǎn)移到不同種類的氨基酸上(主要包括絲氨酸S、蘇氨酸T、酪氨酸Y),從而使蛋白質(zhì)發(fā)生翻譯后修飾的過程。蛋白質(zhì)乙酰化修飾,顧名思義指的就是在蛋白質(zhì)原有基礎(chǔ)上面嫁接上乙?;鶊F。廣東蛋白質(zhì)糖基化修飾組學(xué)有哪些類型
蛋白質(zhì)磷酸化修飾組學(xué)具有探索性。武漢蛋白質(zhì)糖基化修飾組學(xué)費用
蛋白磷酸化檢測方法:一、Western Blot檢測方法優(yōu)勢:1. WB方法簡便,多數(shù)實驗室具備Western Blot設(shè)備條件。2. 許多磷酸化抗體十分靈敏,能夠檢測低至10ug的蛋白樣品。3. 對于豐度低的蛋白,可以先通過IP使用目標(biāo)蛋白的抗體對目標(biāo)蛋白進行富集,再進行WB檢測被磷酸化的蛋白,檢測效率可以提高幾倍甚至幾十倍。二、質(zhì)譜檢測方法:Western Blot的方法雖然簡便,但是對于大規(guī)模分析復(fù)雜的生物樣品的磷酸化水平就不再適用了。而質(zhì)譜卻能很好的解決這一問題。依靠高準(zhǔn)確度質(zhì)譜儀,如今快速準(zhǔn)確分析細胞中高豐度蛋白的磷酸化修飾已是非常簡單的事。具體的檢測方法為先通過SDS-PAGE膠,或者2D-PAGE膠等分離目標(biāo)蛋白,將含有目標(biāo)蛋白的條帶切下,胰酶消化,LC-MS/MS檢測分析蛋白序列和相應(yīng)位點的磷酸化修飾。這個方法適用于同時檢測多個目標(biāo)蛋白的磷酸化水平。武漢蛋白質(zhì)糖基化修飾組學(xué)費用
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