深圳蛋白質(zhì)氧化修飾組學(xué)主要方式

蛋白質(zhì)修飾位點(diǎn)分析：基于LC-MS/MS分析能夠精確測(cè)定蛋白質(zhì)或多肽分子質(zhì)量這一特性，從而檢測(cè)蛋白質(zhì)或者多肽上位點(diǎn)發(fā)生何種修飾?？蓹z測(cè)修飾類型如下： 磷酸化、糖基化、乙?；?、泛素化、丙?；?、丁?；?、丙二?；⑽於；?、琥珀酰化、單甲基化、二甲基化、三甲基化。1、磷酸化：信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞周期、生長(zhǎng)發(fā)育機(jī)理等；2、糖基化：蛋白質(zhì)折疊、更新以及免疫應(yīng)答等；3、乙?；夯虮磉_(dá)調(diào)控、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞代謝、蛋白質(zhì)穩(wěn)定性以及神經(jīng)退行性的病變等；4、泛素化：細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、DNA修復(fù)以及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等；5、甲基化：染色質(zhì)結(jié)構(gòu)及轉(zhuǎn)錄調(diào)控等；6、丙?；?/ 丙二酰化 / 戊二?；?/ 琥珀?；褐饕嬖谟诰€粒體和細(xì)菌中，與代謝過程密切相關(guān)。泛素化修飾是一種重要的翻譯后修飾。深圳蛋白質(zhì)氧化修飾組學(xué)主要方式

蛋白翻譯后修飾檢測(cè)：由于PTMs在基礎(chǔ)生物學(xué)以及疾病發(fā)病機(jī)理中的重要性，因此非常需要對(duì)蛋白質(zhì)的翻譯后修飾進(jìn)行檢測(cè)。對(duì)蛋白翻譯后修飾進(jìn)行研究時(shí)通常需要富集步驟，因?yàn)檫@些翻譯后修飾的蛋白質(zhì)相對(duì)含量較低。大多數(shù)PTMs的檢測(cè)方法與富集策略結(jié)合在一起開發(fā)，以提供比較好的機(jī)會(huì)來識(shí)別、驗(yàn)證和研究蛋白翻譯后修飾的功能。但是，在檢測(cè)已有特異性翻譯后修飾抗體的修飾蛋白質(zhì)時(shí)，可能不需要富集步驟。質(zhì)譜技術(shù)，通過測(cè)定肽段的分子量可以對(duì)該肽段的翻譯后修飾情況進(jìn)行檢測(cè)，并可以對(duì)翻譯后修飾蛋白進(jìn)行定性和定量分析。廣州蛋白質(zhì)甲基化修飾組學(xué)研究質(zhì)譜可以用于已知和未知的翻譯后修飾檢測(cè)。

蛋白質(zhì)磷酸化修飾鑒定方法：免疫印跡技術(shù)：技術(shù)優(yōu)勢(shì)特點(diǎn)。1、 檢測(cè)特異性高。2、能夠特異鑒定單個(gè)磷酸化位點(diǎn)。同位素標(biāo)記（Isotope Labeled）結(jié)合免疫印跡法：此方法的原理是當(dāng)?shù)鞍装l(fā)生磷酸化時(shí)，放射性32P的摻入和分子質(zhì)量變化引起的凝膠遷移（gelshift），再通過免疫印跡方法檢測(cè)同位素標(biāo)記，從而達(dá)到鑒定磷酸化蛋白的目的。技術(shù)優(yōu)勢(shì)特點(diǎn)：1、檢測(cè)技術(shù)靈敏并且直觀。2、常用于體外磷酸化反應(yīng)結(jié)果檢測(cè)。3、 磷酸化鑒定不受抗體限制。4、可同時(shí)分析多個(gè)蛋白磷酸化。

翻譯后修飾蛋白組學(xué)分析：蛋白質(zhì)組學(xué)的研究的工作不只聚焦于細(xì)胞不同生長(zhǎng)時(shí)期或是疾病條件下的蛋白質(zhì)表達(dá)水平變化，許多至關(guān)重要的生命進(jìn)程不只由蛋白質(zhì)相對(duì)豐度控制，更重要的是被時(shí)空特異分布的、可逆的翻譯后修飾所調(diào)控，因而揭示翻譯后修飾發(fā)生規(guī)律是解析蛋白質(zhì)復(fù)雜多樣的生物功能的一個(gè)重要前提。蛋白質(zhì)發(fā)生翻譯后修飾時(shí)其分子質(zhì)量會(huì)發(fā)生響應(yīng)的改變，通過質(zhì)譜能夠精確測(cè)定蛋白質(zhì)或多肽的分子質(zhì)量。同時(shí)，發(fā)生翻譯后修飾的蛋白質(zhì)再樣本中含量低且動(dòng)態(tài)范圍廣，所以在質(zhì)譜檢測(cè)前需要對(duì)發(fā)生修飾的蛋白質(zhì)或肽段進(jìn)行富集。質(zhì)譜是蛋白質(zhì)翻譯后修飾檢測(cè)的常用技術(shù)之一。

翻譯后修飾蛋白組分析：蛋白質(zhì)翻譯后修飾是影響蛋白質(zhì)功能并調(diào)節(jié)整個(gè)細(xì)胞過程的重要方式，幾乎在每個(gè)細(xì)胞過程中都是不可或缺的。分析和鑒定翻譯后修飾蛋白質(zhì)對(duì)揭示蛋白質(zhì)的功能和深入了解各種生理現(xiàn)象具有重要意義。大多數(shù)翻譯后修飾蛋白以低化學(xué)計(jì)量和豐度存在，這限制了在分析全細(xì)胞裂解液時(shí)對(duì)其的檢測(cè)。因此，要在蛋白質(zhì)組學(xué)的范圍內(nèi)表征翻譯后修飾蛋白，純化方法是必要的，以分離修飾蛋白和肽段，然后再進(jìn)行后續(xù)分析。后續(xù)分析一般采用質(zhì)譜技術(shù)進(jìn)行，可以對(duì)翻譯后修飾蛋白組進(jìn)行定性和定量研究。蛋白質(zhì)磷酸化修飾的免疫印跡技術(shù)優(yōu)點(diǎn)：能夠特異鑒定單個(gè)磷酸化位點(diǎn)。貴陽亞硝基化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)類型

泛素化修飾還可以直接影響蛋白質(zhì)的活性和定位。深圳蛋白質(zhì)氧化修飾組學(xué)主要方式

蛋白磷酸化檢測(cè)方法：一、Western Blot檢測(cè)方法優(yōu)勢(shì)：1. WB方法簡(jiǎn)便，多數(shù)實(shí)驗(yàn)室具備Western Blot設(shè)備條件。2. 許多磷酸化抗體十分靈敏，能夠檢測(cè)低至10ug的蛋白樣品。3. 對(duì)于豐度低的蛋白，可以先通過IP使用目標(biāo)蛋白的抗體對(duì)目標(biāo)蛋白進(jìn)行富集，再進(jìn)行WB檢測(cè)被磷酸化的蛋白，檢測(cè)效率可以提高幾倍甚至幾十倍。二、質(zhì)譜檢測(cè)方法：Western Blot的方法雖然簡(jiǎn)便，但是對(duì)于大規(guī)模分析復(fù)雜的生物樣品的磷酸化水平就不再適用了。而質(zhì)譜卻能很好的解決這一問題。依靠高準(zhǔn)確度質(zhì)譜儀，如今快速準(zhǔn)確分析細(xì)胞中高豐度蛋白的磷酸化修飾已是非常簡(jiǎn)單的事。具體的檢測(cè)方法為先通過SDS-PAGE膠，或者2D-PAGE膠等分離目標(biāo)蛋白，將含有目標(biāo)蛋白的條帶切下，胰酶消化，LC-MS/MS檢測(cè)分析蛋白序列和相應(yīng)位點(diǎn)的磷酸化修飾。這個(gè)方法適用于同時(shí)檢測(cè)多個(gè)目標(biāo)蛋白的磷酸化水平。深圳蛋白質(zhì)氧化修飾組學(xué)主要方式

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