質(zhì)譜分析乙?;鞍踪|(zhì)組:質(zhì)譜分析技術(shù)可以對蛋白質(zhì)組中的乙?;鞍走M(jìn)行鑒定、乙?;稽c(diǎn)定位以及定量。當(dāng)質(zhì)譜用于乙酰化定量蛋白組研究中時,因?yàn)橐阴;鞍踪|(zhì)在生物樣本中含量低、動態(tài)范圍廣,需要先對乙酰化肽段進(jìn)行富集,然后再對富集得到的乙?;亩螛悠愤M(jìn)行定量分析。質(zhì)譜定量乙?;鞍捉M采用肽段預(yù)分離降低高豐度蛋白的影響,結(jié)合免疫共沉淀通過高效的抗體富集乙?;碾亩危瑥亩鴮?shí)現(xiàn)大規(guī)模乙?;蔫b定及定量。為了鑒定和定量更多的乙?;亩危诿盖羞^程中還可使用多種不同的酶對蛋白樣品進(jìn)行酶切。蛋白磷酸化修飾過程是通過蛋白激酶催化,將磷酸基團(tuán)從ATP轉(zhuǎn)移到多肽底物的絲氨酸、或酪氨酸殘基上。貴陽氧化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)主要技術(shù)
蛋白質(zhì)學(xué)組翻譯后修飾的類型:翻譯后修飾的類型包括N端fMet或Met的去除、二硫鍵的形成、化學(xué)修飾和肽鍵的裂解,其中磷酸化是比較常見的。蛋白質(zhì)的化學(xué)修飾反應(yīng)是在維持蛋白質(zhì)的完整性和功能性的基礎(chǔ)上,通過基于其氨基酸殘基的化學(xué)反應(yīng)獲得新的生物結(jié)合物。翻譯后修飾在哪里發(fā)生?翻譯后修飾主要發(fā)生在氨基酸側(cè)鏈或蛋白質(zhì)的C端或N端?,F(xiàn)有的官能團(tuán)或新官能團(tuán)的引入可被用于修飾蛋白質(zhì),以擴(kuò)展20個標(biāo)準(zhǔn)氨基酸的化學(xué)組成。翻譯后修飾的位點(diǎn)通常帶有可以在化學(xué)反應(yīng)中充當(dāng)親核試劑的官能團(tuán),如絲氨酸、蘇氨酸和酪氨酸的羥基;賴氨酸、精氨酸和組氨酸胺形式;同時,在蛋白質(zhì)的N端和C端,天冬酰胺也可作為翻譯后修飾中的一種聚糖連接點(diǎn)。翻譯后修飾也發(fā)生在氧化的蛋氨酸和側(cè)鏈位點(diǎn)的一些亞甲基上。北京蛋白質(zhì)糖基化修飾組學(xué)主要方式蛋白質(zhì)翻譯后修飾可以改變蛋白質(zhì)的物理、化學(xué)性質(zhì)。
蛋白質(zhì)翻譯后修飾分析策略:早期蛋白質(zhì)組研究的大部分工作集中在細(xì)胞生長的不同時期,或疾病或有絲分裂原刺激后的蛋白質(zhì)表達(dá)水平的變化。然而,許多生命過程不只受蛋白質(zhì)的相對豐度控制,還受時空分布可逆的翻譯后修飾控制。因此,揭示翻譯后修飾的規(guī)律是了解蛋白質(zhì)復(fù)雜性和多樣的生物學(xué)功能的前提。蛋白質(zhì)的翻譯后修飾是一個復(fù)雜的過程。目前,發(fā)現(xiàn)的比較常見的修飾類型是糖基化、泛素化和磷酸化。樣品中翻譯后修飾蛋白質(zhì)含量低、動態(tài)范圍廣給相關(guān)研究帶來了很大的挑戰(zhàn)?;诜g后修飾蛋白的異質(zhì)性和相對豐度低的特點(diǎn),主要利用凝膠、生物質(zhì)譜和生物信息學(xué)工具對其進(jìn)行研究。用于PTM分析的質(zhì)譜方法類似于用于“常規(guī)”蛋白質(zhì)鑒定的方法,包括自下而上、自中而下和自上而下的蛋白質(zhì)組學(xué)分析。
蛋白質(zhì)乙酰化修飾鑒定流程:1. 組織/細(xì)胞破碎,提取、提純目的蛋白質(zhì)。2. 使用胰蛋白酶將目的蛋白酶解成多肽片段。3. 使用高效特異性乙酰化抗體對乙?;揎楇亩芜M(jìn)行免疫富集。4. 使用LC-MS/MS對富集的乙?;亩芜M(jìn)行鑒定分析。5. 數(shù)據(jù)分析,并對鑒定的乙?;稽c(diǎn)的生物學(xué)功能進(jìn)行解釋預(yù)測。隨著蛋白質(zhì)組研究的發(fā)展,我們越來越深刻地意識到,對于生物體生命活動的管理和調(diào)控過程,密切相關(guān)的不只是單個蛋白質(zhì)層面的修飾狀態(tài),更重要的是研究蛋白質(zhì)組學(xué)水平研究在翻譯后修飾的動態(tài)變化。高質(zhì)、高效的蛋白質(zhì)翻譯后修飾富集技術(shù)和豐富的、準(zhǔn)確的定量手段使得研究蛋白質(zhì)水平的翻譯后修飾組學(xué)成為現(xiàn)實(shí),借助這些組學(xué)研究手段能夠?qū)崿F(xiàn)不同生理病理狀態(tài)下生物樣本在翻譯后修飾水平上的定量比較,深入地揭示翻譯后修飾水平的波動與生物生命活動的密切聯(lián)系。蛋白質(zhì)乙?;揎?,顧名思義指的就是在蛋白質(zhì)原有基礎(chǔ)上面嫁接上乙酰化基團(tuán)。
翻譯后修飾蛋白組分析:蛋白質(zhì)翻譯后修飾是影響蛋白質(zhì)功能并調(diào)節(jié)整個細(xì)胞過程的重要方式,幾乎在每個細(xì)胞過程中都是不可或缺的。分析和鑒定翻譯后修飾蛋白質(zhì)對揭示蛋白質(zhì)的功能和深入了解各種生理現(xiàn)象具有重要意義。大多數(shù)翻譯后修飾蛋白以低化學(xué)計量和豐度存在,這限制了在分析全細(xì)胞裂解液時對其的檢測。因此,要在蛋白質(zhì)組學(xué)的范圍內(nèi)表征翻譯后修飾蛋白,純化方法是必要的,以分離修飾蛋白和肽段,然后再進(jìn)行后續(xù)分析。后續(xù)分析一般采用質(zhì)譜技術(shù)進(jìn)行,可以對翻譯后修飾蛋白組進(jìn)行定性和定量研究。蛋白質(zhì)磷酸化修飾鑒定方法有免疫印跡技術(shù)。江蘇丙二酰化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)主要技術(shù)
蛋白質(zhì)翻譯后修飾是指對翻譯后的蛋白質(zhì)進(jìn)行共價加工的過程。貴陽氧化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)主要技術(shù)
蛋白質(zhì)磷酸化修飾組學(xué):磷酸化蛋白質(zhì)是由蛋白激酶將ATP或GTP分子上的磷酸基團(tuán)轉(zhuǎn)移到底物蛋白特定的氨基酸側(cè)鏈上形成的。蛋白質(zhì)磷酸化是一種可逆的蛋白質(zhì)翻譯后修飾。在哺乳動物的細(xì)胞生命周期中,至少有三分之一的蛋白質(zhì)發(fā)生磷酸化修飾。磷酸化修飾參與許多信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑和細(xì)胞代謝過程,且許多已知的疾病也與蛋白質(zhì)的異常磷酸化有關(guān)。因此,對磷酸化蛋白質(zhì)組進(jìn)行定量研究,尋找差異表達(dá)的磷酸化蛋白質(zhì),有助于發(fā)現(xiàn)疾病的生物標(biāo)志物和尋找新的具有診療潛力的藥物靶標(biāo)。貴陽氧化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)主要技術(shù)
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