湖北LC-MS／MS非靶向脂質(zhì)組學(xué)分析

靶向代謝組學(xué)：靶向代謝組學(xué)（Targeted Metabolomics）是代謝組學(xué)研究的重要組成部分，也是全代謝組研究的延伸與拓展。相對(duì)于全代謝組分析而言，靶向代謝組分析具有特異性強(qiáng)，檢測(cè)靈敏度高和定量準(zhǔn)確等幾個(gè)特點(diǎn)。通過對(duì)血液、尿液或其他體液以及組織中某一特定的代謝物的富集與準(zhǔn)確定量定性分析，一方面可以結(jié)合其它實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)揭示相關(guān)的分子生物學(xué)作用機(jī)制，另一方面，也可以為后續(xù)代謝分子標(biāo)志物的深入研究和開發(fā)利用提供有力支持。靶向代謝組學(xué)可以用于：驗(yàn)證有非靶向代謝組學(xué)實(shí)驗(yàn)提出的假說；進(jìn)行基于假說的探索性實(shí)驗(yàn)，針對(duì)特定代謝物，研究代謝模型。代謝組學(xué)是要涉及研究每一個(gè)代謝組分的共性、特性和規(guī)律。湖北LC-MS／MS非靶向脂質(zhì)組學(xué)分析

代謝組學(xué)樣品收集方法及所需樣本量是什么？(1) 血清樣品： 避免反復(fù)凍融。血液收集在離心管中靜置30分鐘進(jìn)行凝血。8000rpm離心10分鐘，取上清分裝到凍存管中，放置液氮中或-80度凍存；單個(gè)樣本要求體積為50μL。(2) 尿液樣品：臨床樣本請(qǐng)全部取清晨第1次尿液。尿液直接分裝到離心管中，8000rpm離心10分鐘，取上清分裝到凍存管中，放置液氮中或-80度凍存，-80度凍存；單個(gè)樣本要求體積為100μL。(3) 其他樣本收集辦法請(qǐng)咨詢譜領(lǐng)工作人員。江蘇植物靶向代謝組學(xué)分析代謝組學(xué)技術(shù)可應(yīng)用于疾病早期診斷。

GC-MS非靶向代謝組學(xué)能檢測(cè)到哪些類別的代謝物？衍生化極大地拓展了GC/MS的檢測(cè)分析范圍。GC/MS能檢測(cè)到有機(jī)酸、氨基酸、單糖、糖醇、胺類、脂肪酸、吲哚、單甘油酯、核苷、二糖、生育酚、甾醇和膽汁酸等代謝物。如何提高定性準(zhǔn)確度？GC/MS的定性有雙重標(biāo)準(zhǔn)，一是保留指數(shù)，二是質(zhì)譜信息的相似度（similarity）。不同于LC/MS的軟電離源，GC/MS使用的EI源屬于硬電離，能量較強(qiáng)且穩(wěn)定，在將代謝物分子電離后，分子離子峰進(jìn)一步碎裂產(chǎn)生豐富的碎片離子。因此，我們很難在GC/MS上看到分子離子峰。GC/MS提供的是代謝物的“指紋圖譜”，將儀器得到的實(shí)際指紋圖譜和質(zhì)譜庫（如NIST庫）進(jìn)行比對(duì)后，我們將會(huì)得到一個(gè)叫相似度的指標(biāo)。保留指數(shù)和相似度都必須滿足設(shè)定的閾值，軟件才會(huì)給出色譜峰的定性結(jié)果。然后采用標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)譜信息進(jìn)行完全比對(duì)定性，也就是說只有經(jīng)過標(biāo)準(zhǔn)品比對(duì)，代謝物才是被100%定性。

代謝組學(xué)有哪些應(yīng)用？近年來，代謝組學(xué)技術(shù)得到了迅速發(fā)展，主要可應(yīng)用于：功能基因組學(xué)、疾病早期診斷、病因病機(jī)研究、藥物毒理學(xué)、中醫(yī)藥現(xiàn)代化、植物代謝組學(xué)、微生物代謝組學(xué)、營養(yǎng)學(xué)、環(huán)境科學(xué)等生命科學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域。為什么要選擇代謝組學(xué)？首先需要明確的是代謝組學(xué)的目標(biāo)分析物主要為生物小分子及其代謝產(chǎn)物，如糖、有機(jī)酸、脂質(zhì)、維生素、氨基酸、芳香烴之類等化合物。所以，如果關(guān)注的是小分子物質(zhì)，那么采用代謝組學(xué)的方法，可以對(duì)樣品內(nèi)檢測(cè)到的小分子物質(zhì)進(jìn)行定性、定量分析。同于基因組學(xué)和蛋白組學(xué)，代謝組學(xué)的研究反映某一時(shí)刻下正在發(fā)生的生命活動(dòng)情況，研究代謝物的表達(dá)量、代謝物與生理病理變化的關(guān)系，能夠幫助尋找新的生物標(biāo)記物，發(fā)現(xiàn)新的代謝途徑，以及更進(jìn)一步深入了解目前已知的這些途徑，應(yīng)用于疾病的早期診斷、藥物靶點(diǎn)的發(fā)現(xiàn)、疾病的病理生理研究。代謝組學(xué)技術(shù)可應(yīng)用于病因病機(jī)研究。

代謝組學(xué)比較常用到的數(shù)據(jù)分析方法：代謝組學(xué)分析數(shù)據(jù)用于統(tǒng)計(jì)分析時(shí)，數(shù)據(jù)集通常為一個(gè)N × K的矩陣（X矩陣），N表示N個(gè)樣本數(shù)，每一行表示一個(gè)樣品， K表示K個(gè)變量，每一列表示一個(gè)變量，在代謝組學(xué)中變量通常是指代謝物含量。單變量分析方法只分別分析單個(gè)變量，不考慮多個(gè)變量的相互作用與內(nèi)在聯(lián)系。具有簡(jiǎn)單性、易應(yīng)用性和可解釋性。但是無法基于整體數(shù)據(jù)對(duì)所測(cè)樣品的優(yōu)劣、差異進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)和分析。差異倍數(shù)變化大小（Fold Change，F(xiàn)C）表示實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組的含量比值，可以快速考察各個(gè)代謝物在不同組別之間的含量變化大小。代謝組學(xué)可以檢測(cè)的樣品種類有哪些？廣州常規(guī)靶向代謝組學(xué)分析

代謝組學(xué)技術(shù)可應(yīng)用于功能基因組學(xué)。湖北LC-MS／MS非靶向脂質(zhì)組學(xué)分析

GC-MS非靶向代謝組學(xué)醫(yī)學(xué)分析生物樣本為何要衍生化處理？有哪些衍生化的方法？GC的流動(dòng)相為氣體（通常為高純氦），這就要求被分析物必須能夠氣化，而生物樣本中很多內(nèi)源性代謝物都含有極性基團(tuán)，具有沸點(diǎn)高、不易氣化特點(diǎn)。衍生化能夠降低這些代謝物的沸點(diǎn)，增加它們的熱穩(wěn)定性，以便分析能夠順利進(jìn)行。衍生化方法及試劑種類繁多，根據(jù)不同的分析目標(biāo)，需選擇合適的衍生化方法。如分析脂肪酸，我們可以采用甲酯化衍生。在GC/MS代謝平臺(tái)上，比較常用的衍生化方法是硅烷化衍生，因?yàn)樗膹V譜高效。在進(jìn)行硅烷化衍生之前，還需添加甲氧胺吡啶溶液，以封閉羰基（針對(duì)α-酮酸和糖類，保護(hù)作用），減少衍生化副產(chǎn)物的生成。湖北LC-MS／MS非靶向脂質(zhì)組學(xué)分析

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