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翻譯后修飾蛋白的檢測方法:翻譯后修飾蛋白的檢測技術(shù)包括有免疫沉淀、western blot、質(zhì)譜技術(shù)、體外生化分析等。其中,免疫沉淀是大多數(shù)翻譯后修飾檢測中的關(guān)鍵步驟,它利用蛋白特異性抗體或某種翻譯后修飾的特異性抗體來富集目標蛋白,之后再用western blot或質(zhì)譜技術(shù)分析目標蛋白。Western blot和質(zhì)譜技術(shù)均可用于蛋白質(zhì)翻譯后修飾的下游檢測,其中Western blot相對簡單但依賴于特異性抗體且無法識別單個蛋白質(zhì)變化,質(zhì)譜則可以檢測包括未知PTM在內(nèi)的幾乎所有的PTMs但成本更高需要專業(yè)知識來分析產(chǎn)生的大量數(shù)據(jù)。研究人員可以根據(jù)成本、有無可用抗體,以及有沒有目標等選擇合適的方法進行檢測。蛋白質(zhì)的翻譯后修飾通過可逆的共價鍵將小分子或蛋白質(zhì)與底物蛋白質(zhì)上特定的氨基酸結(jié)合。北京蛋白質(zhì)泛素化修飾組學價格
翻譯后修飾蛋白組學分析:在蛋白翻譯后修飾方式的鑒定過程中,蛋白會首先被酶切成肽段,然后進入質(zhì)譜進行分析。通過質(zhì)譜分析,得到的是一系列肽段的分子質(zhì)量信息。對于某一個特定肽段而言,在沒有發(fā)生任何翻譯后修飾的情況下,其序列信息和分子量是確定的。當它發(fā)生了某種翻譯后修飾之后,例如磷酸化修飾,由于序列信息和分子量是確定的,磷酸根的分子量也是確定的。在質(zhì)譜檢測過程中發(fā)現(xiàn)其中的部分肽段的分子量剛好增加了一個磷酸根的分子量,假設(shè)這個肽段就發(fā)生了磷酸化修飾,再通過二級質(zhì)譜圖進行二次確認。杭州蛋白質(zhì)乙?;揎椊M學方法蛋白質(zhì)翻譯后修飾的作用主要是改變蛋白質(zhì)的定位。
乙?;揎椀鞍踪|(zhì)組學分析:乙酰化修飾蛋白質(zhì)組學分析是指從蛋白質(zhì)組學的水平分析蛋白質(zhì)乙?;揎棧ㄒ阴;鞍踪|(zhì)的鑒定和定量。提供基于質(zhì)譜的乙?;鞍捉M研究服務(wù)。蛋白質(zhì)乙酰化包括組蛋白乙?;头墙M蛋白乙酰化。組蛋白乙酰化主要是賴氨酸乙?;?,已在基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用方面被普遍的研究。非組蛋白乙?;瘶?gòu)成了哺乳動物細胞中乙?;鞍椎闹饕糠郑瑓⑴c了所有主要生物過程,包括蛋白質(zhì)的定位、轉(zhuǎn)移、功能和降解,遺傳物質(zhì)的轉(zhuǎn)錄和復(fù)制等。除了重要的生物學功能以外,乙酰化蛋白質(zhì)及其調(diào)控酶還與衰老和多種疾?。ㄈ缟窠?jīng)變形紊亂、心血管疾病等)緊密相關(guān)。因此,對乙酰化修飾蛋白質(zhì)組進行研究有助于進一步探索細胞的生命活動與了解相關(guān)疾病的發(fā)病機制。
蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學:蛋白質(zhì)翻譯后修飾(Post-translational modification, PTM)是指對翻譯后的蛋白質(zhì)進行共價加工的過程。它通過在一個或多個氨基酸殘基加上修飾基團,可以改變蛋白質(zhì)的物理、化學性質(zhì),進而影響蛋白質(zhì)的空間構(gòu)象和活性狀態(tài)、亞細胞定位、折疊及其穩(wěn)定性以及蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用。蛋白質(zhì)翻譯后修飾的豐度變化在生命活動研究中具有重大意義,異常的翻譯后修飾會導致多種疾病的發(fā)生。質(zhì)譜可以分辨蛋白質(zhì)修飾前和修飾后分子量上的變化,因此只要知道靶蛋白翻譯后修飾前后分子量的變化,就能對翻譯后修飾方式進行鑒定和定量。蛋白質(zhì)磷酸化修飾組學具有探索性。
蛋白質(zhì)有哪些翻譯后修飾?作用機制和生物學功能是什么?前體蛋白是沒有活性的,常常要進行一個系列的翻譯后加工,才能成為具有功能的成熟蛋白。加工的類型是多種多樣的,一般分為以下幾種:N-端fMet或Met的切除、二硫鍵的形成、化學修飾和剪切。當合成蛋白質(zhì)時,20種不同的氨基酸會組合成為蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)的翻譯后蛋白質(zhì)其他的生物化學官能團(如醋酸鹽、磷酸鹽、不同的脂類及碳水化合物)會附在蛋白質(zhì)上從而改變蛋白質(zhì)的化學性質(zhì),或是造成結(jié)構(gòu)的改變(如建立雙硫鍵),來擴闊蛋白質(zhì)的功能。再者,酶可以從蛋白質(zhì)的N末端移除氨基酸,或從中間將肽鏈剪開。舉例來說,胰島素它會在建立雙硫鍵后被剪開兩次,并在鏈的中間移走多肽前體,而形成的蛋白質(zhì)包含了兩條以雙硫鍵連接的多肽鏈。蛋白質(zhì)乙?;揎?,顧名思義指的就是在蛋白質(zhì)原有基礎(chǔ)上面嫁接上乙?;鶊F。北京蛋白質(zhì)泛素化修飾組學價格
在早期的研究中,乙?;揎椧恢北徽J為是真核細胞所特有的一種翻譯后修飾。北京蛋白質(zhì)泛素化修飾組學價格
蛋白質(zhì)磷酸化修飾組學技術(shù)優(yōu)點:1、全方面性:磷酸化蛋白質(zhì)組學以整個細胞蛋白為研究對象,研究內(nèi)容包括了細胞內(nèi)具有生命功能的蛋白,如細胞增生、細胞分裂和細胞分化等相關(guān)蛋白,因而研究更為全方面。2、可靠性:傳統(tǒng)的生物學研究蛋白質(zhì)磷酸化往往針對特定條件,以兩個蛋白或更多蛋白之間的相互作用為出發(fā)點,具有局限性,缺乏整體認識。磷酸化蛋白質(zhì)組學則可檢測不同蛋白激酶及磷酸化酶對同一個蛋白磷酸化程度的影響,因而結(jié)果具有普遍性和可靠性。3、有效性:磷酸化蛋白質(zhì)組學反映的是細胞內(nèi)真實發(fā)生的事件,在一次試驗中考慮了不同變量,克服了生物學中逐步添加變量的缺陷。4、探索性:磷酸化蛋白質(zhì)組學以細胞內(nèi)蛋白為研究對象,相對于傳統(tǒng)的生物學研究以及蛋白質(zhì)芯片,更易發(fā)現(xiàn)未知的新磷酸化位點和磷酸化蛋白質(zhì)。如果可以聯(lián)合生物學技術(shù),則可以發(fā)現(xiàn)具有磷酸化或者去磷酸化功能的酶。北京蛋白質(zhì)泛素化修飾組學價格
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