浙江定量蛋白組學(xué)技術(shù)服務(wù)

來源: 發(fā)布時間:2022-02-15

常規(guī)蛋白質(zhì)組學(xué):Labelfree多肽組學(xué):顧名思義,就是不使用任何標(biāo)記方法,直接對肽段進行質(zhì)譜鑒定和定性定量分析。實驗流程簡單,只需要對蛋白進行常規(guī)酶解和除鹽步驟即可上機。定量方式分為兩種:峰面積(Peakintensity)和峰計數(shù)(Spectralcount),常用的是峰面積。不過,由于質(zhì)譜采集時只選取topN的母離子進行二級碎裂和MS2檢測,所以會丟失一些豐度較低的肽段信息,缺失值比較多。TMT/iTRAQ標(biāo)記定量蛋白組學(xué):TMT全稱是TandemMassTag,是經(jīng)典化學(xué)標(biāo)記試劑,普遍用于差異表達蛋白質(zhì)組分析研究中。該技術(shù)采用6重、10重或16重同位素標(biāo)簽,與肽段的氨基發(fā)生共價結(jié)合反應(yīng),可實現(xiàn)同時對6個/10個/16個不同樣品中蛋白質(zhì)的定性和定量分析。(目前16標(biāo)鹿明生物可提供技術(shù)服務(wù))。蛋白質(zhì)組與基因組相對應(yīng),也是一個整體的概念。浙江定量蛋白組學(xué)技術(shù)服務(wù)

蛋白質(zhì)組學(xué)研究這樣做:蛋白質(zhì)組與基因組相對應(yīng),也是一個整體的概念,隨著基因組學(xué)研究的不斷深入,蛋白質(zhì)組學(xué)已逐漸成為研究熱點,對蛋白組學(xué)的研究可以使我們更容易接近生命的機理本質(zhì),但探究成千上萬的蛋白質(zhì)特性也是一個重大的技術(shù)挑戰(zhàn)。蛋白質(zhì)組(Proteome)指的是某一時刻或某一狀態(tài)基因組表達的所有相應(yīng)的蛋白,即細胞、組織或機體全部蛋白質(zhì)的存在及活動形式,其是一個動態(tài)概念,它是在組織、細胞的整體蛋白質(zhì)水平上,探索蛋白質(zhì)作用模式、功能機理、調(diào)節(jié)控制以及蛋白質(zhì)群體內(nèi)的相互關(guān)系、從而獲得生命活動調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的全方面而深入的認識,以揭示生命活動的基本規(guī)律。深圳蛋白質(zhì)定量組學(xué)分析方法蛋白質(zhì)組學(xué)相關(guān)技術(shù)目前在一小部分]應(yīng)用中具有獨特優(yōu)勢。

蛋白質(zhì)組學(xué)主要以全蛋白組(組織、細胞)、線粒體蛋白組、葉綠體蛋白組和外泌體蛋白組為研究對象,通過對蛋白組進行定性、定量、分子功能分析、通路互作分析和蛋白互作分析,揭示生物學(xué)功能、作用機制、疾病診斷的標(biāo)志物以及預(yù)測蛋白的上、下游變化關(guān)系。蛋白質(zhì)組學(xué)可以克服核酸水平預(yù)測的不確定性、反映核酸翻譯后修飾情況。常用技術(shù):非靶向蛋白組學(xué):蛋白質(zhì)定性(膠條鑒定和溶液鑒定),高通量定量蛋白組(Labelfree、iTRAQ/TMT和DIA定量),多肽組學(xué)。

定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù):定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)主要分為標(biāo)記(label)和非標(biāo)記(labelfree)定量策略,標(biāo)記策略又分為體內(nèi)標(biāo)記和體外標(biāo)記兩種。細胞內(nèi)蛋白質(zhì)組豐度的動態(tài)變化對各種生命過程有重要影響。例如在許多疾病的發(fā)生和發(fā)展進程中,常常伴隨著某些蛋白質(zhì)的表達異常。定量蛋白質(zhì)組學(xué)就是把一個基因組表達的全部蛋白質(zhì)或一個復(fù)雜的混合體系中所有的蛋白質(zhì)進行精確的定量和鑒定。非標(biāo)記(labelfree)的定量蛋白組學(xué)技術(shù),Labelfree定量蛋白組學(xué)技術(shù)是通過液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對蛋白質(zhì)酶解肽段進行質(zhì)譜分析,無需使用昂貴的穩(wěn)定同位素標(biāo)簽做內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn),只需分析大規(guī)模鑒定蛋白質(zhì)時所產(chǎn)生的質(zhì)譜數(shù)據(jù),比較不同樣品中相應(yīng)肽段的信號強度,從而對肽段對應(yīng)的蛋白質(zhì)進行相對定量。蛋白質(zhì)組研究技術(shù)在研究對象上,覆蓋了原核微生物、真核微生物、植物和動物等范圍。

蛋白質(zhì)組學(xué)在生物學(xué)領(lǐng)域的研究中的應(yīng)用是怎樣的?研究對象涉及到生物體且生物體內(nèi)表達蛋白,理論上都可以應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)。蛋白質(zhì)組學(xué)是以研究生物體蛋白組成及其變化規(guī)律為目的的應(yīng)用科學(xué)。主要使用的儀器為液質(zhì)聯(lián)用高分辨率質(zhì)譜儀。詳細來說,蛋白質(zhì)組學(xué)包含許多分支:非標(biāo)定量蛋白質(zhì)組學(xué)(定性研究生物體的蛋白組成),定量蛋白質(zhì)組學(xué)(對生物體蛋白表達含量進行測定),修飾蛋白質(zhì)組學(xué)(對蛋白質(zhì)翻譯后修飾進行檢測)及相互作用蛋白質(zhì)組研究(蛋白質(zhì)直接相互作用機制解析)等。蛋白質(zhì)組學(xué)屬于后基因組時代的科學(xué)研究,針對基因表達產(chǎn)物進行檢測與定量。因此更能反應(yīng)出生物體生理條件下的水平與狀態(tài)。蛋白質(zhì)組學(xué)將成為尋找疾病分子標(biāo)記和藥物靶標(biāo)比較有效的方法之一。山東Label free非標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)一般流程

蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)的發(fā)展已經(jīng)成為現(xiàn)代的生物技術(shù)快速發(fā)展的重要支撐。浙江定量蛋白組學(xué)技術(shù)服務(wù)

蛋白質(zhì)組學(xué)在醫(yī)學(xué)的研究應(yīng)用:蛋白質(zhì)組學(xué)(Proteomics)是研究細胞、組織或生物體中蛋白質(zhì)組成、定位、變化及其相互作用規(guī)律的科學(xué),包括對蛋白質(zhì)表達模式和蛋白質(zhì)組功能模式的研究。蛋白質(zhì)組學(xué)的發(fā)展對尋找疾病的診斷標(biāo)志、篩選藥物靶點、毒理學(xué)研究等有重要意義,也因此被普遍應(yīng)用于醫(yī)學(xué)研究。蛋白質(zhì)組學(xué)研究,總體可分為一下幾個步驟:(1)差異篩選(Discovery)(2)初步驗證(Verification)(3)然后確診(Validation)?;谫|(zhì)譜的蛋白質(zhì)組學(xué)是目前比較主流的高通量蛋白質(zhì)研究手段,當(dāng)前在醫(yī)療健康方面的應(yīng)用主要集中于基礎(chǔ)研究和轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)。浙江定量蛋白組學(xué)技術(shù)服務(wù)

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