貴陽高通量蛋白質(zhì)組學(xué)分析方法

蛋白質(zhì)組學(xué)在生物學(xué)領(lǐng)域的研究中的應(yīng)用是怎樣的？研究對象涉及到生物體且生物體內(nèi)表達蛋白，理論上都可以應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)。蛋白質(zhì)組學(xué)是以研究生物體蛋白組成及其變化規(guī)律為目的的應(yīng)用科學(xué)。主要使用的儀器為液質(zhì)聯(lián)用高分辨率質(zhì)譜儀。詳細來說，蛋白質(zhì)組學(xué)包含許多分支：非標定量蛋白質(zhì)組學(xué)（定性研究生物體的蛋白組成），定量蛋白質(zhì)組學(xué)（對生物體蛋白表達含量進行測定），修飾蛋白質(zhì)組學(xué)（對蛋白質(zhì)翻譯后修飾進行檢測）及相互作用蛋白質(zhì)組研究（蛋白質(zhì)直接相互作用機制解析）等。蛋白質(zhì)組學(xué)屬于后基因組時代的科學(xué)研究，針對基因表達產(chǎn)物進行檢測與定量。因此更能反應(yīng)出生物體生理條件下的水平與狀態(tài)。蛋白質(zhì)組學(xué)包括蛋白質(zhì)的表達水平。貴陽高通量蛋白質(zhì)組學(xué)分析方法

蛋白組究竟研究的是什么呢？第1，蛋白質(zhì)定性，或者說大規(guī)模檢測某些蛋白質(zhì)是否存在于樣品當中；第2，蛋白質(zhì)定量，也就是大規(guī)模檢測某些蛋白質(zhì)的含量（包括一定含量與相對含量）；第3，蛋白質(zhì)翻譯后修飾，這些修飾主要包括磷酸化，泛素化，糖基化，乙?；鹊?，也包括對這些翻譯后修飾的定量研究。這三大塊中所提到的大規(guī)模，既可以是樣品數(shù)量的大規(guī)模高通量，也可以是少量樣本中蛋白數(shù)量的大規(guī)模高通量。研究原因：首先，由于翻譯調(diào)控和翻譯后調(diào)控的存在，RNA的表達量與實際對應(yīng)蛋白質(zhì)的含量相關(guān)性并不高，就簡單地測試了酵母中mRNA和對應(yīng)蛋白質(zhì)的定量相關(guān)性，結(jié)果是，低豐度蛋白與mRNA的相關(guān)性尤其低，而高豐度蛋白和其mRNA的相關(guān)性則高，經(jīng)過平均后r值只為0.4。貴陽高通量蛋白質(zhì)組學(xué)分析方法蛋白質(zhì)組學(xué)由此獲得蛋白質(zhì)水平上的關(guān)于疾病發(fā)生，細胞代謝等過程的整體而全方面的認識。

LabelFree(非標記蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù))：在非標記策略的定量模型中，主要涉及兩種不同的算法：其一，以肽段的色譜峰積分面積為基礎(chǔ)，通過比較一對生物樣品中相對應(yīng)到蛋白質(zhì)酶解多肽的色譜積分面積而得到兩者的相對豐度；其二，以肽段被質(zhì)譜檢測的計數(shù)為基礎(chǔ)，通過歸一化來表征被檢測蛋白質(zhì)的相對豐度。非標記技術(shù)認為肽段在質(zhì)譜中被捕獲檢測的頻率（Counts）與其在混合物中的豐度成正相關(guān)，因此蛋白質(zhì)被質(zhì)譜檢測的計數(shù)反映了蛋白質(zhì)的豐度，通過適當?shù)臄?shù)學(xué)公式可以將質(zhì)譜檢測計數(shù)與蛋白質(zhì)的量聯(lián)系起來，從而對蛋白質(zhì)進行定量。

Labelfree非標記定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)特點：（1）不需要標記處理，操作簡單，成本低、實驗周期短；（2）每個樣品單獨處理、上機；（3）可以做任意樣本的總蛋白質(zhì)差異定量，樣品類型不受限制；（4）對單個樣品的蛋白總量要求相對較低，對于組織本身蛋白量不高，可以選擇Label-Free，適用于一些難收集樣品；（5）定性沒有問題，但是定量的準確性較標記定量稍差，會受到質(zhì)譜穩(wěn)定性等因素的影響；（6）適合于大樣本量的定量比較（大于24個樣本）。蛋白質(zhì)組學(xué)在醫(yī)學(xué)的研究應(yīng)用：蛋白質(zhì)組學(xué)(Proteomics)是研究細胞、組織或生物體中蛋白質(zhì)組成、定位、變化及其相互作用規(guī)律的科學(xué)。蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)有等電聚焦。

PRM靶向定量蛋白質(zhì)組學(xué)分析流程是怎樣的？要做PRM首先要明確目標蛋白（或多肽）是什么，設(shè)計和建立針對這些目標蛋白PRM質(zhì)譜采集方法，然后對待測樣品進行PRM數(shù)據(jù)采集，將得到的原始譜圖數(shù)據(jù)導(dǎo)入分析軟件提取子離子信息進行定量。另外，如果配制已知濃度的標準肽段，用PRM額外做一個標準曲線，即可實現(xiàn)一定的定量。PRM靶向定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)能應(yīng)用到哪些方面？研究工作中涉及到蛋白或多肽定量的都可以通過PRM技術(shù)來實現(xiàn)。具體說來，比如驗證定量蛋白質(zhì)組學(xué)中某些蛋白的變化，多肽的相對和一定的定量，想做蛋白定量卻沒有抗體，針對蛋白修飾位點的定量，想同時定量多個蛋白的情況等，都可以用PRM來做。蛋白質(zhì)組研究技術(shù)在研究對象上，覆蓋了原核微生物、真核微生物、植物和動物等范圍。貴陽高通量蛋白質(zhì)組學(xué)分析方法

蛋白質(zhì)組學(xué)將成為尋找疾病分子標記和藥物靶標比較有效的方法之一。貴陽高通量蛋白質(zhì)組學(xué)分析方法

蛋白質(zhì)組學(xué)在醫(yī)學(xué)的研究應(yīng)用：蛋白質(zhì)組學(xué)(Proteomics)是研究細胞、組織或生物體中蛋白質(zhì)組成、定位、變化及其相互作用規(guī)律的科學(xué)，包括對蛋白質(zhì)表達模式和蛋白質(zhì)組功能模式的研究。蛋白質(zhì)組學(xué)的發(fā)展對尋找疾病的診斷標志、篩選藥物靶點、毒理學(xué)研究等有重要意義，也因此被普遍應(yīng)用于醫(yī)學(xué)研究。蛋白質(zhì)組學(xué)研究，總體可分為一下幾個步驟：（1）差異篩選（Discovery）（2）初步驗證（Verification）（3）然后確診（Validation）?；谫|(zhì)譜的蛋白質(zhì)組學(xué)是目前比較主流的高通量蛋白質(zhì)研究手段，當前在醫(yī)療健康方面的應(yīng)用主要集中于基礎(chǔ)研究和轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)。貴陽高通量蛋白質(zhì)組學(xué)分析方法

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