蛋白質(zhì)組學(xué):質(zhì)譜分析蛋白質(zhì)組學(xué)的基本原理主要是通過(guò)測(cè)定被測(cè)樣品離子的理化性質(zhì)來(lái)進(jìn)行分析,根據(jù)樣品的質(zhì)量譜圖和相關(guān)信息從而得到定性和定量結(jié)果。目前,蛋白質(zhì)組學(xué)質(zhì)譜分析一般是根據(jù)保留時(shí)間(retentiontime)、質(zhì)荷比(m/z)、離子強(qiáng)度(intensity)這三個(gè)維度對(duì)肽蛋白質(zhì)進(jìn)行鑒定和定量,即3D蛋白質(zhì)組學(xué)。4D蛋白質(zhì)組學(xué)在3D蛋白質(zhì)組學(xué)的基礎(chǔ)之上增加了第四維度,離子淌度(mobility),主要根據(jù)離子的形狀和截面對(duì)離子進(jìn)行分離,能夠區(qū)分m/z差值非常小的肽段,使低豐度蛋白信號(hào)能夠被區(qū)分和識(shí)別出來(lái)。4D蛋白質(zhì)組學(xué)基于timsTOFPro質(zhì)譜儀,結(jié)合PASEF(ParallelAccumulationSerialFragmentation,同步累積連續(xù)碎裂)與TIMS(TrappedIonMobilitySpectrometry,離子遷移譜),可重復(fù)測(cè)量所有檢測(cè)離子的碰撞截面(CCS),能更快、更靈敏的進(jìn)行蛋白質(zhì)組定性和定量。蛋白質(zhì)組學(xué)在應(yīng)用中,更多地用于提供高通量蛋白質(zhì)定性定量信息。廣東定量N糖基化蛋白質(zhì)組學(xué)領(lǐng)域
蛋白質(zhì)組學(xué)在醫(yī)療和健康方面有什么應(yīng)用?具體而言,蛋白質(zhì)組學(xué)在此類應(yīng)用中,更多地用于提供高通量蛋白質(zhì)定性定量信息。作為檢測(cè)手段的蛋白質(zhì)組學(xué):事實(shí)上,在當(dāng)前的生物醫(yī)學(xué)研究和臨床診斷中,蛋白質(zhì)組學(xué)相關(guān)技術(shù)有非常多的應(yīng)用。因?yàn)榈鞍踪|(zhì)組學(xué)技術(shù)的本質(zhì)(從分析化學(xué)角度來(lái)看),就是對(duì)蛋白質(zhì)的定性定量分析。生物醫(yī)學(xué)和臨床診斷中,需要大量表征一種或多種蛋白質(zhì)的含量、氨基酸序列、翻譯后修飾等信息。蛋白質(zhì)組學(xué)相關(guān)技術(shù)目前在一小部分]應(yīng)用中具有獨(dú)特優(yōu)勢(shì)。有很多蛋白質(zhì)組學(xué)的研究者在工業(yè)界和醫(yī)院進(jìn)行相關(guān)研究和日常工作。很容易發(fā)現(xiàn),當(dāng)前蛋白質(zhì)組學(xué)的臨床應(yīng)用更多地集中在第二類。第1類的應(yīng)用更接近于生物醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究,目前還沒(méi)有和大部分人的現(xiàn)實(shí)生活產(chǎn)生關(guān)系。浙江PRM定量蛋白質(zhì)組學(xué)分析方法蛋白質(zhì)組學(xué)研究不僅是探索生命奧秘的必須工作,也能為人類健康事業(yè)帶來(lái)巨大的利益。
蛋白質(zhì)組學(xué)在醫(yī)療和健康方面有什么應(yīng)用?基于質(zhì)譜的蛋白質(zhì)組學(xué)是目前比較主流的高通量蛋白質(zhì)研究手段,當(dāng)前在醫(yī)療健康方面的應(yīng)用主要集中于基礎(chǔ)研究和轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)。隨著質(zhì)譜、系統(tǒng)生物學(xué)、生物信息學(xué)等相關(guān)學(xué)科的發(fā)展,我認(rèn)為今后我們會(huì)更多地在現(xiàn)實(shí)生活中見(jiàn)到蛋白質(zhì)組學(xué)相關(guān)的應(yīng)用。如定量胰島素、鑒定血紅蛋白氨基酸突變(鐮刀形紅細(xì)胞癥)、糖化血紅蛋白比例測(cè)定等。從測(cè)試體量估計(jì),應(yīng)該遠(yuǎn)小于1%的ELISA測(cè)試量。由于成本和通量等原因,蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)并不如ELISA適合大量的日常分析。但對(duì)于一些分析有問(wèn)題的項(xiàng)目,采用基于質(zhì)譜(或二維膠等手段)的蛋白質(zhì)組學(xué)有獨(dú)特的技術(shù)優(yōu)勢(shì)。另外,蛋白質(zhì)組學(xué)方法開(kāi)發(fā)和驗(yàn)證周期短,在中高級(jí)特殊應(yīng)用(如極少使用的特殊蛋白指標(biāo)臨床檢測(cè)、未知疾病研究和控制)中也有其獨(dú)特優(yōu)勢(shì)。
蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù):電噴霧質(zhì)譜:ESI-MS是利用高電場(chǎng)使質(zhì)譜進(jìn)樣端的毛細(xì)管柱流出的液滴帶電,在N2氣流的作用下,液滴溶劑蒸發(fā),表面積縮小,表面電荷密度不斷增加,直至產(chǎn)生的庫(kù)侖力與液滴表面張力達(dá)到雷利極限,液滴爆裂為帶電的子液滴,這一過(guò)程不斷重復(fù)使液滴非常細(xì)小呈噴霧狀,這時(shí)液滴表面的電場(chǎng)非常強(qiáng)大,使分析物離子化并以帶單電荷或多電荷的離子形式進(jìn)入質(zhì)量分析器。ESI-MS從液相中產(chǎn)生離子,一般說(shuō)來(lái),肽段的混合物經(jīng)過(guò)液相色譜分離后,經(jīng)過(guò)偶聯(lián)的與在線連接的離子阱質(zhì)譜分析,給出肽片段的精確的氨基酸序列,但是分析時(shí)間一般較長(zhǎng)。目前,許多實(shí)驗(yàn)室兩種質(zhì)譜方法連用,獲得有意義的蛋白質(zhì)的肽段序列,設(shè)計(jì)探針或引物來(lái)獲得有意義的基因。隨著蛋白質(zhì)組研究的深入,又有多種新型質(zhì)譜儀出現(xiàn),主要是在上述質(zhì)譜儀的基礎(chǔ)上進(jìn)行改進(jìn)與重新組合。有很多蛋白質(zhì)組學(xué)的研究者在工業(yè)界和醫(yī)院進(jìn)行相關(guān)研究和日常工作。
Labelfree非標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)特點(diǎn):(1)不需要標(biāo)記處理,操作簡(jiǎn)單,成本低、實(shí)驗(yàn)周期短;(2)每個(gè)樣品單獨(dú)處理、上機(jī);(3)可以做任意樣本的總蛋白質(zhì)差異定量,樣品類型不受限制;(4)對(duì)單個(gè)樣品的蛋白總量要求相對(duì)較低,對(duì)于組織本身蛋白量不高,可以選擇Label-Free,適用于一些難收集樣品;(5)定性沒(méi)有問(wèn)題,但是定量的準(zhǔn)確性較標(biāo)記定量稍差,會(huì)受到質(zhì)譜穩(wěn)定性等因素的影響;(6)適合于大樣本量的定量比較(大于24個(gè)樣本)。蛋白質(zhì)組學(xué)在醫(yī)學(xué)的研究應(yīng)用:蛋白質(zhì)組學(xué)(Proteomics)是研究細(xì)胞、組織或生物體中蛋白質(zhì)組成、定位、變化及其相互作用規(guī)律的科學(xué)。蛋白質(zhì)組學(xué)的研究是生命科學(xué)進(jìn)入后基因時(shí)代的特征。廣東Label free多肽組學(xué)檢測(cè)價(jià)格
蛋白質(zhì)組隨著基因組學(xué)研究的不斷深入,蛋白質(zhì)組學(xué)已逐漸成為研究熱點(diǎn)。廣東定量N糖基化蛋白質(zhì)組學(xué)領(lǐng)域
定量蛋白質(zhì)組學(xué)方法學(xué)介紹:iTRAQ:iTRAQ定量是目前定量蛋白質(zhì)組學(xué)應(yīng)用比較普遍的技術(shù),該技術(shù)的關(guān)鍵原理是多肽標(biāo)記和定量,將多肽的含量轉(zhuǎn)化為114、115、116和117同位素的含量(或113、114、115、116、117、118、119和121的8標(biāo)記),從而簡(jiǎn)化了定量的復(fù)雜性,然后通過(guò)多肽定量值回歸到蛋白的定量值,從而測(cè)定出不同樣本之間蛋白質(zhì)的差異。iTRAQ定量不依賴樣本,可檢測(cè)出較低豐度蛋白,胞漿蛋白、膜蛋白、胞外蛋白等,且定量準(zhǔn)確,可同時(shí)對(duì)8個(gè)樣本進(jìn)行分析,并可同時(shí)得出鑒定和定量的結(jié)果,特別適用于采用多種處理方式或來(lái)自多個(gè)處理時(shí)間的樣本的差異蛋白分析。廣東定量N糖基化蛋白質(zhì)組學(xué)領(lǐng)域
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