蛋白質(zhì)乙酰化修飾鑒定流程：1. 組織/細(xì)胞破碎，提取、提純目的蛋白質(zhì)。2. 使用胰蛋白酶將目的蛋白酶解成多肽片段。3. 使用高效特異性乙?；贵w對(duì)乙酰化修飾肽段進(jìn)行免疫富集。4. 使用LC-MS/MS對(duì)富集的乙?；亩芜M(jìn)行鑒定分析。5. 數(shù)據(jù)分析，并對(duì)鑒定的乙?；稽c(diǎn)的生物學(xué)功能進(jìn)行解釋預(yù)測(cè)。隨著蛋白質(zhì)組研究的發(fā)展，我們?cè)絹?lái)越深刻地意識(shí)到，對(duì)于生物體生命活動(dòng)的管理和調(diào)控過(guò)程，密切相關(guān)的不只是單個(gè)蛋白質(zhì)層面的修飾狀態(tài)，更重要的是研究蛋白質(zhì)組學(xué)水平研究在翻譯后修飾的動(dòng)態(tài)變化。高質(zhì)、高效的蛋白質(zhì)翻譯后修飾富集技術(shù)和豐富的、準(zhǔn)確的定量手段使得研究蛋白質(zhì)水平的翻譯后修飾組學(xué)成為現(xiàn)實(shí)，借助這些組學(xué)研究手段能夠?qū)崿F(xiàn)不同生理病理狀態(tài)下生物樣本在翻譯后修飾水平上的定量比較，深入地揭示翻譯后修飾水平的波動(dòng)與生物生命活動(dòng)的密切聯(lián)系。泛素化修飾還可以直接影響蛋白質(zhì)的活性和定位。武漢泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)
蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用是蛋白質(zhì)發(fā)揮功能的主要機(jī)制之一,在DNA損傷修復(fù),自噬和代謝等過(guò)程中都扮演著非常重要的角色,蛋白相互作用異常便會(huì)導(dǎo)致疾病的發(fā)生.在蛋白質(zhì)的賴氨酸,絲氨酸和蘇氨酸等氨基酸殘基上,可發(fā)生甲基化,乙?；?磷酸化和泛素化等200多種翻譯后修飾,這些修飾通常能改變蛋白質(zhì)的電性,疏水性和空間結(jié)構(gòu)等屬性,為與之結(jié)合的蛋白提供結(jié)合的錨定或產(chǎn)生位阻效應(yīng),像一把開關(guān)在時(shí)空上精確調(diào)控蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的發(fā)生以及動(dòng)態(tài)變化.結(jié)構(gòu)研究表明,蛋白質(zhì)之間的相互作用通常由臨近的幾個(gè)氨基酸殘基直接結(jié)合,替換該區(qū)域的氨基酸殘基,通常能破壞結(jié)合,使其失去部分功能或酶活性,可以針對(duì)性地開發(fā)和設(shè)計(jì)抑制劑,用于疾病的診療。北京琥珀?；揎椀鞍踪|(zhì)組學(xué)類型質(zhì)譜是蛋白質(zhì)翻譯后修飾檢測(cè)的常用技術(shù)之一。
什么是蛋白質(zhì)的翻譯后修飾？蛋白質(zhì)的翻譯后修飾（）是指蛋白質(zhì)在翻譯后的化學(xué)修飾。對(duì)于大部分的蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)，這是蛋白質(zhì)生物合成的較后步驟。PTM是細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)中的重要組成部分。通過(guò)向修飾基團(tuán)添加一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基或通過(guò)蛋白質(zhì)水解切割該基團(tuán)來(lái)改變蛋白質(zhì)的性質(zhì)，是蛋白質(zhì)生物學(xué)功能表達(dá)的重要步驟。生物蛋白質(zhì)的翻譯后修飾極大地增加了蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的類型和功能。這個(gè)過(guò)程調(diào)節(jié)細(xì)胞周期和蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄，并影響表觀遺傳學(xué)。
翻譯后修飾蛋白組學(xué)分析：蛋白質(zhì)組學(xué)的研究的工作不只聚焦于細(xì)胞不同生長(zhǎng)時(shí)期或是疾病條件下的蛋白質(zhì)表達(dá)水平變化，許多至關(guān)重要的生命進(jìn)程不只由蛋白質(zhì)相對(duì)豐度控制，更重要的是被時(shí)空特異分布的、可逆的翻譯后修飾所調(diào)控，因而揭示翻譯后修飾發(fā)生規(guī)律是解析蛋白質(zhì)復(fù)雜多樣的生物功能的一個(gè)重要前提。蛋白質(zhì)發(fā)生翻譯后修飾時(shí)其分子質(zhì)量會(huì)發(fā)生響應(yīng)的改變，通過(guò)質(zhì)譜能夠精確測(cè)定蛋白質(zhì)或多肽的分子質(zhì)量。同時(shí)，發(fā)生翻譯后修飾的蛋白質(zhì)再樣本中含量低且動(dòng)態(tài)范圍廣，所以在質(zhì)譜檢測(cè)前需要對(duì)發(fā)生修飾的蛋白質(zhì)或肽段進(jìn)行富集。蛋白質(zhì)翻譯后修飾的作用主要是改變蛋白質(zhì)的功能。
蛋白質(zhì)有哪些翻譯后修飾？作用機(jī)制和生物學(xué)功能是什么？前體蛋白是沒有活性的，常常要進(jìn)行一個(gè)系列的翻譯后加工，才能成為具有功能的成熟蛋白。加工的類型是多種多樣的，一般分為以下幾種：N-端fMet或Met的切除、二硫鍵的形成、化學(xué)修飾和剪切。當(dāng)合成蛋白質(zhì)時(shí)，20種不同的氨基酸會(huì)組合成為蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)的翻譯后蛋白質(zhì)其他的生物化學(xué)官能團(tuán)（如醋酸鹽、磷酸鹽、不同的脂類及碳水化合物）會(huì)附在蛋白質(zhì)上從而改變蛋白質(zhì)的化學(xué)性質(zhì)，或是造成結(jié)構(gòu)的改變（如建立雙硫鍵），來(lái)擴(kuò)闊蛋白質(zhì)的功能。再者，酶可以從蛋白質(zhì)的N末端移除氨基酸，或從中間將肽鏈剪開。舉例來(lái)說(shuō)，胰島素它會(huì)在建立雙硫鍵后被剪開兩次，并在鏈的中間移走多肽前體，而形成的蛋白質(zhì)包含了兩條以雙硫鍵連接的多肽鏈。常見的蛋白質(zhì)翻譯后修飾包括糖基化。北京琥珀?；揎椀鞍踪|(zhì)組學(xué)類型
常見的蛋白質(zhì)翻譯后修飾包括泛素化。武漢泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)
蛋白磷酸化檢測(cè)方法：質(zhì)譜檢測(cè)方法優(yōu)勢(shì)：1. 準(zhǔn)確度高，能夠同時(shí)檢測(cè)多個(gè)蛋白的多個(gè)磷酸化位點(diǎn)。2. 適用于大規(guī)模分析蛋白磷酸化水平。3. 不依賴于磷酸化抗體。在實(shí)際應(yīng)用中，Western Blot與質(zhì)譜分析方法各有各的好，誰(shuí)也無(wú)法完全被另一種方法所替代。所以在選擇測(cè)定磷酸化修飾的時(shí)候還應(yīng)該根據(jù)具體需要來(lái)決定。如果研究的蛋白正好有商業(yè)化的磷酸化抗體，那么lucky you，你可以選擇Western Blot進(jìn)行快速磷酸化測(cè)定研究。但是如果你所研究的蛋白質(zhì)沒有可用的商業(yè)化磷酸抗體，或是抗體價(jià)效過(guò)低，亦或是需要大規(guī)模地檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)磷酸化蛋白的水平的話，質(zhì)譜檢測(cè)會(huì)是更好地選擇。武漢泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)
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