哈爾濱4D定量蛋白質(zhì)組學(xué)價格

來源: 發(fā)布時間:2022-01-30

PRM靶向蛋白組學(xué):PRM技術(shù)是一種根據(jù)已知實測信息或質(zhì)譜檢測規(guī)律的假定信息對樣品中的蛋白質(zhì)進行靶向定量的技術(shù)。該技術(shù)主要應(yīng)用儀器為QExactive系列質(zhì)譜儀,首先以四極桿作為質(zhì)量過濾器,特異性地選擇與預(yù)先設(shè)定質(zhì)荷比相同的肽段離子(母離子)通過,隨后在高能碰撞池中碎裂母離子,之后通過Orbitrap分析碎片離子(子離子)得到肽段的二級質(zhì)譜信息。四極桿的高選擇性離子過濾與Orbitrap高分辨率測量技術(shù)的結(jié)合使得PRM技術(shù)有很高的特異性,并且有效的降低了背景噪音,去除了干擾離子,提高了靈敏度。在確保數(shù)據(jù)質(zhì)量的前提下,為了在一次分析中檢測更多的蛋白質(zhì),可用預(yù)置PRM(ScheduledPRM,sPRM)的方法,這種方法需要知道每個肽段的保留時間信息,使得每個肽段只在其洗脫時間窗口內(nèi)執(zhí)行PRM檢測,很大程度上提高了檢測效率,可同時檢測上百種蛋白質(zhì)。PRM技術(shù)是目前應(yīng)用較普遍的質(zhì)譜蛋白質(zhì)靶向定量技術(shù)。蛋白質(zhì)組學(xué)將成為尋找疾病分子標(biāo)記和藥物靶標(biāo)比較有效的方法之一。哈爾濱4D定量蛋白質(zhì)組學(xué)價格

我們究竟怎么研究蛋白質(zhì)組學(xué)呢?目前高通量檢測蛋白質(zhì)的方法中,還是首推基于質(zhì)譜的方法,納流液相可以將復(fù)雜樣品中的肽段高效地分離,然后依次進入質(zhì)譜,對每個被離子化的肽段及其碎裂后碎片的荷質(zhì)比進行分析,從而得到該肽段的序列信息,然后根據(jù)對應(yīng)的色譜峰面積或者報告離子強度等信息,我們又可以得到該肽段的定量信息。蛋白組學(xué)研究怎么做?當(dāng)下蛋白組學(xué)研究中應(yīng)用比較普遍的技術(shù)是同位素標(biāo)記定量(iTRAQ/TMT技術(shù))。iTRAQ/TMT技術(shù)是利用DDA掃描模式,其掃描的方式是將一級質(zhì)譜信號比較強的Top20的多肽進行二級打碎,然后進入二級質(zhì)譜進行檢測。其優(yōu)勢是二級譜圖采集的肽段信息都來源于同一條多肽,有利于后續(xù)的定性分析。武漢DIA定量蛋白質(zhì)組學(xué)項目蛋白質(zhì)組學(xué)與其它學(xué)科的交叉也將日益明顯和重要。

PRM靶向定量蛋白質(zhì)組學(xué)分析流程是怎樣的?要做PRM首先要明確目標(biāo)蛋白(或多肽)是什么,設(shè)計和建立針對這些目標(biāo)蛋白PRM質(zhì)譜采集方法,然后對待測樣品進行PRM數(shù)據(jù)采集,將得到的原始譜圖數(shù)據(jù)導(dǎo)入分析軟件提取子離子信息進行定量。另外,如果配制已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)肽段,用PRM額外做一個標(biāo)準(zhǔn)曲線,即可實現(xiàn)一定的定量。PRM靶向定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)能應(yīng)用到哪些方面?研究工作中涉及到蛋白或多肽定量的都可以通過PRM技術(shù)來實現(xiàn)。具體說來,比如驗證定量蛋白質(zhì)組學(xué)中某些蛋白的變化,多肽的相對和一定的定量,想做蛋白定量卻沒有抗體,針對蛋白修飾位點的定量,想同時定量多個蛋白的情況等,都可以用PRM來做。

蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù):電噴霧質(zhì)譜:ESI-MS是利用高電場使質(zhì)譜進樣端的毛細(xì)管柱流出的液滴帶電,在N2氣流的作用下,液滴溶劑蒸發(fā),表面積縮小,表面電荷密度不斷增加,直至產(chǎn)生的庫侖力與液滴表面張力達到雷利極限,液滴爆裂為帶電的子液滴,這一過程不斷重復(fù)使液滴非常細(xì)小呈噴霧狀,這時液滴表面的電場非常強大,使分析物離子化并以帶單電荷或多電荷的離子形式進入質(zhì)量分析器。ESI-MS從液相中產(chǎn)生離子,一般說來,肽段的混合物經(jīng)過液相色譜分離后,經(jīng)過偶聯(lián)的與在線連接的離子阱質(zhì)譜分析,給出肽片段的精確的氨基酸序列,但是分析時間一般較長。目前,許多實驗室兩種質(zhì)譜方法連用,獲得有意義的蛋白質(zhì)的肽段序列,設(shè)計探針或引物來獲得有意義的基因。隨著蛋白質(zhì)組研究的深入,又有多種新型質(zhì)譜儀出現(xiàn),主要是在上述質(zhì)譜儀的基礎(chǔ)上進行改進與重新組合。生物質(zhì)譜技術(shù)是蛋白質(zhì)組學(xué)研究中比較重要的鑒定技術(shù)。

定量蛋白質(zhì)組學(xué)分析:特點:(1)不同樣本標(biāo)記之后混樣,統(tǒng)一處理上機,減少了分別上機造成的實驗誤差,并利用同位素標(biāo)簽的豐度來檢測,定量更準(zhǔn)確,重復(fù)性更好;(2)由于需要標(biāo)記試劑標(biāo)記,因此成本相對較高;(3)通量高,在一次實驗中比較多可同時比較8個樣品;(4)利用基于同一個參考樣品的辦法,可以進行多于8個樣品的定量比較;(5)iTRAQ的覆蓋度高、靈敏度高。Label-Free定量蛋白質(zhì)組學(xué)分析:Label-Free定量,即非標(biāo)記的定量蛋白質(zhì)組學(xué),不需要對比較樣本做特定標(biāo)記處理,只需要比較特定肽段/蛋白在不同樣品間的色譜質(zhì)譜響應(yīng)信號便可得到樣品間蛋白表達量的變化,通常用于分析大規(guī)模蛋白鑒定和定量時所產(chǎn)生的質(zhì)譜數(shù)據(jù)。蛋白質(zhì)組與基因組相對應(yīng),也是一個整體的概念。山東醫(yī)學(xué)蛋白質(zhì)組學(xué)檢測價格

iTRAQ定量是目前定量蛋白質(zhì)組學(xué)應(yīng)用比較普遍的技術(shù)。哈爾濱4D定量蛋白質(zhì)組學(xué)價格

蛋白質(zhì)組學(xué)在醫(yī)療和健康方面有什么應(yīng)用?具體而言,蛋白質(zhì)組學(xué)在此類應(yīng)用中,更多地用于提供高通量蛋白質(zhì)定性定量信息。作為檢測手段的蛋白質(zhì)組學(xué):事實上,在當(dāng)前的生物醫(yī)學(xué)研究和臨床診斷中,蛋白質(zhì)組學(xué)相關(guān)技術(shù)有非常多的應(yīng)用。因為蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)的本質(zhì)(從分析化學(xué)角度來看),就是對蛋白質(zhì)的定性定量分析。生物醫(yī)學(xué)和臨床診斷中,需要大量表征一種或多種蛋白質(zhì)的含量、氨基酸序列、翻譯后修飾等信息。蛋白質(zhì)組學(xué)相關(guān)技術(shù)目前在一小部分]應(yīng)用中具有獨特優(yōu)勢。有很多蛋白質(zhì)組學(xué)的研究者在工業(yè)界和醫(yī)院進行相關(guān)研究和日常工作。很容易發(fā)現(xiàn),當(dāng)前蛋白質(zhì)組學(xué)的臨床應(yīng)用更多地集中在第二類。第1類的應(yīng)用更接近于生物醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究,目前還沒有和大部分人的現(xiàn)實生活產(chǎn)生關(guān)系。哈爾濱4D定量蛋白質(zhì)組學(xué)價格

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