河南個(gè)性化定制靶向代謝組學(xué)分析方法

代謝組學(xué)研究方法：代謝組學(xué)的研究方法與蛋白質(zhì)組學(xué)的方法類(lèi)似，通常有兩種方法。一種方法稱(chēng)作代謝物指紋分析 （metabolomic fingerprinting），采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（LC-MS）的方法，比較不同血樣中各自的代謝產(chǎn)物以確定其中所有的代謝產(chǎn)物。從本質(zhì)上來(lái)說(shuō)，代謝指紋分析涉及比較不同個(gè)體中代謝產(chǎn)物的質(zhì)譜峰，然后了解不同化合物的結(jié)構(gòu)，建立一套完備的識(shí)別這些不同化合物特征的分析方法。另一種方法是代謝輪廓分析（metabolomic profiling）,研究人員假定了一條特定的代謝途徑，并對(duì)此進(jìn)行更深入的研究。代謝組學(xué)可以檢測(cè)的樣品種類(lèi)有哪些？河南個(gè)性化定制靶向代謝組學(xué)分析方法

代謝組學(xué)概念：代謝組學(xué)主要研究的是作為各種代謝路徑的底物和產(chǎn)物的小分子代謝物（MW<1000）。 在食品安全領(lǐng)域，利用代謝組學(xué)工具發(fā)現(xiàn)農(nóng)獸藥等在動(dòng)植物體內(nèi)的相關(guān)生物標(biāo)志物也是一個(gè)熱點(diǎn)領(lǐng)域。其樣品主要是動(dòng)植物的細(xì)胞和組織的提取液。主要技術(shù)手段是核磁共振（NMR），質(zhì)譜（MS），色譜（HPLC，GC），其中以NMR為主。通過(guò)檢測(cè)一系列樣品的NMR 譜圖，再結(jié)合模式識(shí)別方法，可以判斷出生物體的病理生理狀態(tài)，并有可能找出與之相關(guān)的生物標(biāo)志物（biomarker）。河南非靶向代謝組學(xué)技術(shù)分析代謝組學(xué)是對(duì)某一生物或細(xì)胞中相對(duì)分子量小于1,000的小分子代謝產(chǎn)物進(jìn)行定性和定量分析的一門(mén)新學(xué)科。

代謝組學(xué)需要多少的生物學(xué)重復(fù)？生物學(xué)重復(fù)指的是相同處理的相同類(lèi)型的生物樣本的數(shù)量（如相同劑量給藥后2小時(shí)的小鼠采集并且相同儲(chǔ)存條件和處理方法血清樣本）。相較于基因和蛋白，代謝物處于生命活動(dòng)的下游，收到環(huán)境和遺傳背景等因素影響較大，生物學(xué)重復(fù)少可能會(huì)放大組內(nèi)差異對(duì)于整體差異的影響，進(jìn)而影響結(jié)果（如準(zhǔn)確和足夠多的找出生物標(biāo)志物）。因此根據(jù)不同的生物類(lèi)型，需要不同的生物學(xué)重復(fù)來(lái)增加數(shù)據(jù)的可靠性和說(shuō)服力。代謝組學(xué)的研究方法與蛋白質(zhì)組學(xué)的方法類(lèi)似。

藥物代謝和代謝組學(xué)區(qū)別：代謝組學(xué)與藥物代謝不同是它關(guān)注的對(duì)象不是外源性的藥物而是生物體本身就有的內(nèi)源性代謝物。這些代謝物是糖，脂肪，蛋白質(zhì)，核酸，膽汁酸等等代謝得到的。還有共生菌代謝的，是一個(gè)龐大的混合物。目的是通過(guò)樣本的對(duì)比，發(fā)現(xiàn)潛在標(biāo)志物，指導(dǎo)疾病早期診斷甚至基因水平的研究。而藥物代謝的目標(biāo)是只要只要追蹤到這種藥物分子在體內(nèi)變化就好，相當(dāng)具有靶向性，因此使用的技術(shù)手段就是LC-MS。檢測(cè)藥物的中間體，和具體的藥效，藥代動(dòng)的效應(yīng)。代謝組學(xué)先進(jìn)分析檢測(cè)技術(shù)結(jié)合模式識(shí)別和專(zhuān)家系統(tǒng)等計(jì)算分析方法是代謝組學(xué)研究的基本方法。

代謝組學(xué)樣品收集方法及所需樣本量是什么？(1) 血清樣品： 避免反復(fù)凍融。血液收集在離心管中靜置30分鐘進(jìn)行凝血。8000rpm離心10分鐘，取上清分裝到凍存管中，放置液氮中或-80度凍存；單個(gè)樣本要求體積為50μL。(2) 尿液樣品：臨床樣本請(qǐng)全部取清晨第1次尿液。尿液直接分裝到離心管中，8000rpm離心10分鐘，取上清分裝到凍存管中，放置液氮中或-80度凍存，-80度凍存；單個(gè)樣本要求體積為100μL。(3) 其他樣本收集辦法請(qǐng)咨詢(xún)譜領(lǐng)工作人員。代謝組學(xué)作為系統(tǒng)生物學(xué)的重要組成部分，在臨床醫(yī)學(xué)領(lǐng)域具有普遍的應(yīng)用前景。河南非靶向代謝組學(xué)技術(shù)分析

代謝組學(xué)主要技術(shù)手段是質(zhì)譜（MS）。河南個(gè)性化定制靶向代謝組學(xué)分析方法

GC-MS非靶向代謝組學(xué)能檢測(cè)到哪些類(lèi)別的代謝物？衍生化極大地拓展了GC/MS的檢測(cè)分析范圍。GC/MS能檢測(cè)到有機(jī)酸、氨基酸、單糖、糖醇、胺類(lèi)、脂肪酸、吲哚、單甘油酯、核苷、二糖、生育酚、甾醇和膽汁酸等代謝物。如何提高定性準(zhǔn)確度？GC/MS的定性有雙重標(biāo)準(zhǔn)，一是保留指數(shù)，二是質(zhì)譜信息的相似度（similarity）。不同于LC/MS的軟電離源，GC/MS使用的EI源屬于硬電離，能量較強(qiáng)且穩(wěn)定，在將代謝物分子電離后，分子離子峰進(jìn)一步碎裂產(chǎn)生豐富的碎片離子。因此，我們很難在GC/MS上看到分子離子峰。GC/MS提供的是代謝物的“指紋圖譜”，將儀器得到的實(shí)際指紋圖譜和質(zhì)譜庫(kù)（如NIST庫(kù)）進(jìn)行比對(duì)后，我們將會(huì)得到一個(gè)叫相似度的指標(biāo)。保留指數(shù)和相似度都必須滿(mǎn)足設(shè)定的閾值，軟件才會(huì)給出色譜峰的定性結(jié)果。然后采用標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)譜信息進(jìn)行完全比對(duì)定性，也就是說(shuō)只有經(jīng)過(guò)標(biāo)準(zhǔn)品比對(duì)，代謝物才是被100%定性。河南個(gè)性化定制靶向代謝組學(xué)分析方法

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