研究方向基因表達(dá)差異研究
檢測時完全不依賴傳統(tǒng)的Ct值即可實現(xiàn)真正意義上的***定量,從而提供了比實時熒光定量PCR更精確的基因差異表達(dá)研究,尤其對于那些靶基因表達(dá)差異微小的情況:microRNA、lncRNAs等的表達(dá)分析、等位基因的不平衡表達(dá)、單細(xì)胞基因表達(dá)分析、Exosome內(nèi)核酸分子定量分析等。
拷貝數(shù)變異(CNV)研究
微滴化的樣品處理及檢測,這種擺脫Ct值的計算方法而直接獲取目標(biāo)基因的***拷貝數(shù),為拷貝數(shù)變異的研究提供了***的檢測精度。是其他諸如二代測序、芯片雜交等平臺無法達(dá)到的,因此采用數(shù)字PCR能夠有效對NGS、aCGH的實驗結(jié)果進(jìn)行驗證,并具有成本低、通量高的特點。
支持多重數(shù)字PCR,可選全中文分析軟件。深圳國產(chǎn)數(shù)字PCR
數(shù)字PCR也叫Digital PCR(dPCR),是近幾年發(fā)展起來的一種核酸定量分析技術(shù)。相較于傳統(tǒng)熒光定量PCR來說,數(shù)字PCR對結(jié)果的判定不依賴于擴(kuò)增曲線循環(huán)Ct值,不受擴(kuò)增效率的影響,能夠直接讀出DNA的分子個數(shù),能夠?qū)ζ鹗紭颖竞怂岱肿?**定量。
數(shù)字PCR基本原理是將一個樣本分成幾十到幾萬份,然后再將其分配到不同的反應(yīng)單元中,使每個微滴單元包含一個或多個拷貝的核酸分子(即DNA模板),每個單元都會對目標(biāo)分子進(jìn)行擴(kuò)增,然后再對每個單元進(jìn)行熒光信號的統(tǒng)計并計算。相對而言,傳統(tǒng)PCR或qPCR反應(yīng)都是發(fā)生于同一體系當(dāng)中,這也是數(shù)字PCR與其比較大的區(qū)別。
廣州國產(chǎn)數(shù)字PCR解決方案單細(xì)胞研究:測序、PCR。
目前數(shù)字PCR技術(shù)在臨床領(lǐng)域已經(jīng)有著非常***且***地應(yīng)用,例如在病原微生物檢測中的應(yīng)用:HBV檢測、HIV檢測、甲型流感病毒檢測等;在產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用:13/18/21號染色體三倍體檢測、遺傳性耳聾檢測、地中海貧血檢測及優(yōu)生五項的病毒檢測等;在**靶向***相關(guān)基因檢測中的應(yīng)用:肺*EGFR基因突變、ALK基因融合檢測、結(jié)直腸*KRAS、BRAF基因突變檢測、乳腺*HER2基因擴(kuò)增檢測、神經(jīng)膠質(zhì)瘤IDH基因突變檢測等。以**靶向***相關(guān)基因檢測為例,在**形成的超早期,會出現(xiàn)**細(xì)胞的壞死和凋亡,這些凋亡或壞死的**細(xì)胞會釋放其DNA進(jìn)入外周血,因此通過分析循環(huán)血液中是否含有**特異的游離DNA就可以達(dá)到**早期篩查的目的。然而此時DNA含量極低,對檢測的靈敏度和精確性要求極高,目前只有數(shù)字PCR技術(shù)可以檢測出來。另外進(jìn)行個體化***時,需要對基因組樣本進(jìn)行分析,此時利用數(shù)字PCR技術(shù)也能**提高結(jié)果的可信性,進(jìn)而建立合理***方案。
定量PCR和數(shù)字PCR的特點:
5. 目前定量PCR已經(jīng)能實現(xiàn)高通量樣品條件下的自動化操作。
6. 數(shù)字PCR在單分子層面上的***定量,可以徹底擺脫對標(biāo)準(zhǔn)曲線的依賴而直接給出靶序列的拷貝數(shù),提高了實驗結(jié)果在批內(nèi)和批間的穩(wěn)定性,甚至能用來對標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行定標(biāo)。
7. 基于***定量的方式,數(shù)字PCR結(jié)果的高重復(fù)性和高精度可實現(xiàn)微小差異的基因表達(dá)分析,如等位基因的不平衡表達(dá)、單細(xì)胞基因表達(dá)分析、microRNA表達(dá)分析等等。所謂“微小差異”的標(biāo)準(zhǔn)一般而言是指表達(dá)水平的差異在2倍以內(nèi)。
8. 同等條件下,數(shù)字PCR在靈敏度方面擁有優(yōu)勢,使得該技術(shù)已成為**的液態(tài)活檢、病原微生物檢測、轉(zhuǎn)基因成分測定、宿主殘留DNA分析等的熱門技術(shù)。
我國***擁有完全自主知識產(chǎn)權(quán)的微滴式數(shù)字PCR儀MiniDrop?研發(fā)成功并投入生產(chǎn)。MiniDrop?創(chuàng)新性采用高壓驅(qū)動的方法將樣本分割成50萬份,打破了國外廠商在微滴式數(shù)字PCR領(lǐng)域的壟斷。永諾生物依以微滴式數(shù)字PCR儀為**,打造了全自動液體處理工作站、核酸提取試劑盒等創(chuàng)新產(chǎn)品,致力于解決**、***領(lǐng)域的精細(xì)診斷這是國內(nèi)***微滴式數(shù)字PCR檢測系統(tǒng),能廣泛應(yīng)用于醫(yī)療、農(nóng)業(yè)、環(huán)境等領(lǐng)域,未來,采用外周血、唾液、尿液、腦脊液等樣本進(jìn)行低成本、高靈敏、快速的無創(chuàng)檢測成為可能。關(guān)于病原菌的檢測鑒定。廣州國產(chǎn)數(shù)字PCR解決方案
動物源性的檢測分析。深圳國產(chǎn)數(shù)字PCR
相對于二代測序、基因芯片和定量PCR而言,數(shù)字PCR具備以下優(yōu)勢:
● 靈敏度可達(dá)到單個核酸分子:檢測限低至0.001%,主要系為數(shù)字PCR可以實現(xiàn)靶標(biāo)DNA/RNA的生物濃縮;
● 無需標(biāo)準(zhǔn)曲線活參照基因進(jìn)行對比來測定核算量,可對靶分子起始量進(jìn)行***定量,直接獨處DNA分子的個數(shù);
● 適合環(huán)境復(fù)雜樣品的檢測:終點PCR檢測,不依賴Ct值,不依賴擴(kuò)增效率,能克服PCR***劑的影響,避免樣品間的交叉***問題,適合各類復(fù)雜環(huán)境中的樣本進(jìn)行***定量,如動血樣、糞便、尿液、痰液、水樣、土壤、植物等; 深圳國產(chǎn)數(shù)字PCR
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