紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)是基于紫外可見(jiàn)分光光度法原理,利用物質(zhì)分子對(duì)紫外可見(jiàn)光譜區(qū)的輻射吸收來(lái)進(jìn)行分析的一種分析儀器。主要由光源、單色器、吸收池、檢測(cè)器和信號(hào)處理器等部件組成。其工作原理為分子的紫外可見(jiàn)吸收光譜是由于分子中的某些基團(tuán)吸收了紫外可見(jiàn)輻射光后,發(fā)生了電子能級(jí)躍遷而產(chǎn)生的吸收光譜。由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結(jié)構(gòu),其吸收光能量的情況也就不會(huì)相同,因此,每種物質(zhì)就有其特有的、固定的吸收光譜曲線,可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長(zhǎng)處的吸光度的高低判別或測(cè)定該物質(zhì)的含量,這就是分光光度定性和定量分析的基礎(chǔ)。本文介紹的是日立U-3010型號(hào)紫外分光光度計(jì)的使用方法。日立U-3010型號(hào)紫外分光光度計(jì)的使用1.開(kāi)電源,先開(kāi)U-3010電源,再啟動(dòng)電腦2.點(diǎn)擊桌面上UV,啟動(dòng)程序3.點(diǎn)擊method窗口,將會(huì)出現(xiàn)GeneralQuantitationinstrumentMonitorReport五個(gè)對(duì)話框,如下圖所示:4.設(shè)置(1)General對(duì)話框;(2)Quantitation對(duì)話框,如果測(cè)波長(zhǎng)選擇wavelength,數(shù)量可選多個(gè),比如測(cè)定:260nm,280nm,230nm,則選擇3個(gè);如圖所示:(3)Instrument對(duì)話框,將你要測(cè)定的波長(zhǎng)值依次輸入框內(nèi);(4)設(shè)置好后,點(diǎn)確定鍵5.放入空白對(duì)照。在測(cè)定時(shí),紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)受到強(qiáng)電磁場(chǎng)干擾,應(yīng)去除無(wú)線電干擾環(huán)境后,再次測(cè)量。廣西原子吸收分光光度計(jì)原理
一些儀器具有多種光源供選擇:紫外光、可見(jiàn)光和甚至紅外光(780nm至3,000nm)。鎢燈和鹵素?zé)粢话阒桓采w可見(jiàn)光部分(大約380nm到800nm)。而氙燈則可以覆蓋紫外光和可見(jiàn)光區(qū)域。分光光度計(jì)的帶寬(bandwidth)很大程度上依賴(lài)于單色儀的狹縫的寬度??梢酝渡涑鰧?shí)驗(yàn)精確要求的光譜。一種嚴(yán)格帶寬使得儀器能對(duì)復(fù)雜的混合物進(jìn)行高分辨率的吸光測(cè)量。可變的單色儀的狹縫寬度能使一臺(tái)分光光度計(jì)滿(mǎn)足多種實(shí)驗(yàn)需要。為了測(cè)量吸光值,分光光度計(jì)制造商通常使用光電倍增管(photo-multipliertubes,PMTs)和光敏二極管。海南紫外可見(jiàn)分光分光光度計(jì)原理每天使用可見(jiàn)分光光度計(jì)結(jié)束后,應(yīng)仔細(xì)檢查樣品室內(nèi)是否有溶液溢出,若有溢出必須隨時(shí)用濾紙吸干。
UV-5500(PC)型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)儀器特點(diǎn)和功能◆雙光束比例監(jiān)測(cè)光學(xué)系統(tǒng)◆儀器采用128*64位點(diǎn)陣式液晶顯示器,每屏可顯示多組數(shù)據(jù)◆能直接建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,并可用標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行相關(guān)的測(cè)試◆可連續(xù)測(cè)試和存儲(chǔ)200組數(shù)據(jù),并可存儲(chǔ)200條標(biāo)準(zhǔn)曲線,用戶(hù)可根據(jù)編號(hào)方便調(diào)用,測(cè)試數(shù)據(jù)可斷電保持◆波長(zhǎng)自動(dòng)校準(zhǔn)、自動(dòng)設(shè)定、偏差自我修復(fù)◆換燈免光學(xué)調(diào)試◆UV-5500PC型標(biāo)配元析公司的掃描軟件可直接完成光度測(cè)量、定量測(cè)試、定性測(cè)試、動(dòng)力學(xué)測(cè)試、多波長(zhǎng)測(cè)試、DNA/蛋白質(zhì)測(cè)試及數(shù)據(jù)圖譜的處理儀器指標(biāo)波長(zhǎng)范圍190-1100nm光譜帶寬2nm雜散光≤◆UV-5500PC型標(biāo)配元析公司的掃描軟件可直接完成光度測(cè)量、定量測(cè)試、定性測(cè)試、動(dòng)力學(xué)測(cè)試、多波長(zhǎng)測(cè)試、DNA/蛋白質(zhì)測(cè)試及數(shù)據(jù)圖譜的處理。
雜散光是分析樣品的非吸收光,隨著樣品濃度的增加,雜散光的影響也隨之增大,將給分析結(jié)果帶來(lái)一定的誤差。在紫外的短波區(qū)域光源強(qiáng)度和檢測(cè)器的靈敏度均明顯減弱,雜散光的影響更不能忽視。因此,雜散光的大小也是儀器性能的一項(xiàng)重要指標(biāo)。使用與維護(hù)1、若大幅度改變測(cè)試波長(zhǎng),需稍等片刻,等燈熱平衡后,重新校正“0”和“100%”點(diǎn)。然后再測(cè)量。2、指針式儀器在未接通電源時(shí),電表的指針必須位于零刻度上。若不是這種情況,需進(jìn)行機(jī)械調(diào)零。3、比色皿使用完畢后,請(qǐng)立即用蒸餾水沖洗干凈,并用干凈柔軟的紗布將水跡擦去,以防止表面光潔度被破壞,影響比色皿的透光率。4、操作人員不應(yīng)輕易動(dòng)燈泡及反光鏡燈。分光光度計(jì)已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)儀器。
在測(cè)量準(zhǔn)確性和精確度時(shí),將空白濾光片和樣品濾光片放入插槽內(nèi)。將測(cè)得的輸出吸光度值與允許值范圍比較。在檢查波長(zhǎng)時(shí),測(cè)定三個(gè)測(cè)試濾光片在對(duì)應(yīng)波長(zhǎng)(260nm、280nm和800nm)下的吸光度,以確定每個(gè)波長(zhǎng)的變異系數(shù)。許多分光光度計(jì),包括Eppendorf的所有儀器,都帶有一個(gè)特殊的功能——自檢。Eppendorf建議用戶(hù)至少每周運(yùn)行一次自檢,但自動(dòng)自檢的頻率可根據(jù)需要進(jìn)行設(shè)定。自檢主要檢查儀器的幾個(gè)部分。它通過(guò)測(cè)定現(xiàn)有波長(zhǎng)的隨機(jī)誤差來(lái)校驗(yàn)檢測(cè)器,通過(guò)檢查大能量、隨機(jī)誤差、基準(zhǔn)傳感器的信號(hào)和光強(qiáng)度來(lái)校驗(yàn)光源。因?yàn)榉止夤舛扔?jì)涉及到光學(xué)、電學(xué)和結(jié)構(gòu)等,所以它需要在一定的環(huán)境中應(yīng)用。遼寧分光分光光度計(jì)原理
紫外分光光度計(jì)的檢測(cè)器利用光電效應(yīng)將透過(guò)吸收池的光信號(hào)變成可測(cè)的電信號(hào)。廣西原子吸收分光光度計(jì)原理
在零點(diǎn)不受光的條件下,用零點(diǎn)調(diào)節(jié)器將儀器調(diào)至零點(diǎn),觀察3分鐘讀取透射比的變化,即,為零點(diǎn)穩(wěn)定性。在儀器測(cè)量范圍兩端向中間靠10nm處,調(diào)節(jié)零點(diǎn)后,蓋上樣品室蓋(打開(kāi)光門(mén)),使光電管受光,調(diào)節(jié)透射比為95%(數(shù)顯儀器調(diào)至100%)察3分鐘讀取透射比的變化,為光電流穩(wěn)定性。在零點(diǎn)不受光的條件下,用零點(diǎn)調(diào)節(jié)器將儀器調(diào)至零點(diǎn),觀察3分鐘讀取透射比的變化,即,為零點(diǎn)穩(wěn)定性。在儀器測(cè)量范圍兩端向中間靠10nm處,調(diào)節(jié)零點(diǎn)后,蓋上樣品室蓋(打開(kāi)光門(mén)),使光電管受光,調(diào)節(jié)透射比為95%(數(shù)顯儀器調(diào)至100%)察3分鐘讀取透射比的變化,為光電流穩(wěn)定性。廣西原子吸收分光光度計(jì)原理