分光光度計可分為紫外分光光度計、可見光分光光度計(或比色計)、紅外分光光度計或原子吸收分光光度計。項目對分析結(jié)果的影響1、波長準確度分光光度法原理要求照射在樣品池上的單色光必須對應(yīng)于樣品吸收光譜中的某一個吸收峰的波長。試劑盒包含一個空白濾光片、三個檢查光度的濾光片和三個校正波長的濾光片。每個濾光片的吸光值是相對空白濾光片測定的。這個試劑盒不僅能讓用戶獲得測量準確性的信息,也能提供精確度的信息,包括平均值和變異系數(shù)。根據(jù)所能測定的波長范圍的不同,分光光度計可以分成紫外分光光度計、可見光分光光度計和紅外分光光度計。河南火焰分光分光光度計推薦
在測量準確性和精確度時,將空白濾光片和樣品濾光片放入插槽內(nèi)。將測得的輸出吸光度值與允許值范圍比較。在檢查波長時,測定三個測試濾光片在對應(yīng)波長(260nm、280nm和800nm)下的吸光度,以確定每個波長的變異系數(shù)。許多分光光度計,包括Eppendorf的所有儀器,都帶有一個特殊的功能——自檢。Eppendorf建議用戶至少每周運行一次自檢,但自動自檢的頻率可根據(jù)需要進行設(shè)定。自檢主要檢查儀器的幾個部分。它通過測定現(xiàn)有波長的隨機誤差來校驗檢測器,通過檢查大能量、隨機誤差、基準傳感器的信號和光強度來校驗光源。中國香港uv分光光度計型號紫外分光光度計的光譜是帶狀光譜。
可見分光光度計【原理】可見分光光度計是一種結(jié)構(gòu)簡潔、使用方便的單光束分光光度計,基于樣品對單色光的選擇吸收特性可用于對樣品進行定性和定量分析。其定量分析根據(jù)相對測量原理工作,即選定樣品的溶劑(或空氣)作為標準試樣,設(shè)定其透射比為100%,被測樣品的透射比則相對于標準試樣(或空氣)而得到,在一定的濃度范圍,各參量遵循朗伯—比耳定律:A:吸光度T:相對于標準試樣的透射比I:光透過被測樣品后照射到光電傳感器上的強度I0:光透過標準試樣后照射到光電傳感器上的強度K:樣品溶液的比消光系數(shù)L:樣品溶液在光路中的長度C:樣品濃度【儀器結(jié)構(gòu)】【使用方法】(1)開機預(yù)熱儀器接通電源,微機進行系統(tǒng)自檢,LCD顯示窗口顯示相應(yīng)的產(chǎn)品型號后,儀器進入工作狀態(tài)。默認的工作模式是T。注意:為使內(nèi)部達到熱平衡,開機預(yù)熱時間不小于30分鐘。(2)改變波長通過旋轉(zhuǎn)波長手輪改變波長,并在波長觀察窗的刻度選擇所需的波長。(3)放置參比與待測樣品選擇測試用的比色皿,把盛放參比和待測液的樣品放入樣品架內(nèi),通過樣品架拉桿來選擇樣品的位置。當拉桿到位時有定位感,到位時輕輕推拉一下以保證定位的正確。(4)調(diào)0%T、調(diào)100%T/0A為保證儀器進入正確的測試狀態(tài)。
一些儀器具有多種光源供選擇:紫外光、可見光和甚至紅外光(780nm至3,000nm)。鎢燈和鹵素燈一般只覆蓋可見光部分(大約380nm到800nm)。而氙燈則可以覆蓋紫外光和可見光區(qū)域。分光光度計的帶寬(bandwidth)很大程度上依賴于單色儀的狹縫的寬度??梢酝渡涑鰧嶒灳_要求的光譜。一種嚴格帶寬使得儀器能對復雜的混合物進行高分辨率的吸光測量??勺兊膯紊珒x的狹縫寬度能使一臺分光光度計滿足多種實驗需要。為了測量吸光值,分光光度計制造商通常使用光電倍增管(photo-multipliertubes,PMTs)和光敏二極管。保持紫外-可見分光光度計表面和工作環(huán)境的清潔。
分光光度計分光光度計是實驗室檢測核酸或者蛋白樣品濃度**常用的工具之一。儀器使用頻繁,但甚少見到有人維護。其實,保持分光光度計清潔、無污染是成功操作的關(guān)鍵。清潔儀器我們應(yīng)該用蘸有中性清潔劑的軟布擦拭分光光度計的表面。刺激性的清潔劑可能會損壞儀器表面。你也可以清潔比色皿本身。比色皿插槽只能用蘸有乙醇或異丙醇的無絨棉簽來清潔。這可防止液體進入內(nèi)部。如果你必須要用水清潔,那么可用蘸有乙醇或異丙醇的棉簽來加速干燥。比色皿插槽的蓋子也可以清潔,但不是泡在清潔劑中。如有必要,拆下蓋子,用蘸有溫和清潔劑的軟布或無絨棉簽來清潔。此外,平時不使用時,應(yīng)蓋上比色皿插槽的蓋子,以免灰塵或其他污染物落入。消毒和凈化如果分光光度計被微生物所污染,那么可采用下列步驟進行消毒和凈化。首先,利用溫和的清潔劑來清潔設(shè)備。然后,用蘸有消毒劑(通常是酒精溶液)的軟布擦拭表面。如有必要,拆下并清潔比色皿插槽。檢查組件維護的另一方面在于檢查分光光度計的光度準確性。Eppendorf提供了一個濾光片系統(tǒng)(BioSpectrometerreferencefilterkit),以評估光度準確性和系統(tǒng)的波長誤差。試劑盒包含一個空白濾光片、三個檢查光度的濾光片和三個校正波長的濾光片。關(guān)于儀器的系統(tǒng)誤差,可通過對分光光度計的定期校正來克服,若所需準確度很高的測量,則必須天天校正。原子吸收分光分光光度計教程
紫外分光光度計一般覆蓋190nm和380nm波長,通常利用氘燈照明。河南火焰分光分光光度計推薦
由于儀器的制造和調(diào)整誤差,單色光的實際波長與儀器的波長讀數(shù)值間都存在一定的誤差。但是,當吸收峰寬度較小,而且吸收峰兩側(cè)邊緣比較陡直,此時波長準確度的影響就必須引起注意。2、透射比(吸光度)準確度很顯然,透射比或吸光度的誤差越大,測試結(jié)果的可信性越差,從而影響到測試數(shù)據(jù)的準確性。3、雜散光雜散光是由于光學元件制造誤差以及光學和機械零件表面的漫反射形成的。雜散光是分析樣品的非吸收光,隨著樣品濃度的增加,雜散光的影響也隨之增大,將給分析結(jié)果帶來一定的誤差。在紫外的短波區(qū)域光源強度和檢測器的靈敏度均明顯減弱,雜散光的影響更不能忽視。因此,雜散光的大小也是儀器性能的一項重要指標。使用與維護1、若大幅度改變測試波長,需稍等片刻,等燈熱平衡后,重新校正“0”和“100%”點。然后再測量。2、指針式儀器在未接通電源時,電表的指針必須位于零刻度上。若不是這種情況,需進行機械調(diào)零。3、比色皿使用完畢后,請立即用蒸餾水沖洗干凈,并用干凈柔軟的紗布將水跡擦去,以防止表面光潔度被破壞,影響比色皿的透光率。4、操作人員不應(yīng)輕易動燈泡及反光鏡燈。河南火焰分光分光光度計推薦