發(fā)貨地點(diǎn):江蘇省無(wú)錫市
發(fā)布時(shí)間:2024-10-31
1/2ms生長(zhǎng)培養(yǎng)基的培養(yǎng)結(jié)果為:中雙11號(hào)油菜種子在1/2ms生長(zhǎng)培養(yǎng)基上的萌發(fā)率為100%,培養(yǎng)9d的幼苗,表現(xiàn)為植株健壯、平均株高為,葉色濃綠,莖稈粗壯、平均莖中粗為,根系發(fā)達(dá)、平均根數(shù)為(>)、平均主根長(zhǎng)為。如圖3所示。培養(yǎng)實(shí)例3和對(duì)比培養(yǎng)例3的培養(yǎng)結(jié)果比較:中雙11號(hào)油菜種子在1/2cs生長(zhǎng)培養(yǎng)基和1/2ms生長(zhǎng)培養(yǎng)基上的萌發(fā)率均為100%;在相同條件下培養(yǎng)9d時(shí),與1/2ms生長(zhǎng)培養(yǎng)基相比,1/2cs生長(zhǎng)培養(yǎng)基中的幼苗長(zhǎng)勢(shì)更佳,其株高、根的數(shù)目?jī)?yōu)于1/2ms生長(zhǎng)培養(yǎng)基,莖粗及平均主根長(zhǎng)度與1/2ms生長(zhǎng)培養(yǎng)基相近。如圖3所示。培養(yǎng)實(shí)例4:馬鈴薯無(wú)菌苗培養(yǎng)生長(zhǎng)培養(yǎng)基配制:1/2cs基本培養(yǎng)基+蔗糖30g/l+植物凝膠8g/l,用超純水溶解,。1/2cs基本培養(yǎng)基的成分及用量如表1所示。培養(yǎng)方法:以克新18號(hào)馬鈴薯為例,將配制好的1/2cs生長(zhǎng)培養(yǎng)基分裝于長(zhǎng)、寬、高9cm的耐高溫培養(yǎng)盒中,選擇生長(zhǎng)旺盛的馬鈴薯脫毒苗,于無(wú)菌環(huán)境下,根據(jù)實(shí)際需要,用手術(shù)剪刀剪取約1cm長(zhǎng)的至少帶有1個(gè)葉芽的莖端或莖段,用彎頭鑷子將其1/3-1/2長(zhǎng)度垂直插入培養(yǎng)基中;于溫度22-23℃、濕度50-70%、光照強(qiáng)度2000-3000lux、光照和黑暗交替(光照時(shí)間14h、黑暗時(shí)間10h)條件下培養(yǎng)。MEM培養(yǎng)基在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)出高效的穩(wěn)定性。福建F12培養(yǎng)基包括
二氧化碳不斷被釋放,培養(yǎng)液變酸,pH值發(fā)生變化。酚紅是細(xì)胞培養(yǎng)基中**常用的pH指示劑,但依靠細(xì)胞培養(yǎng)基中的酚紅等pH指示劑進(jìn)行判斷,需要實(shí)驗(yàn)員的經(jīng)驗(yàn)積累,存在較大的主觀性。實(shí)際上,個(gè)性化細(xì)胞培養(yǎng)基或是無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基中酚紅含量較少或是不含酚紅,只能通過pH計(jì)或者pH電極進(jìn)行pH值的檢測(cè),結(jié)果更為準(zhǔn)確可靠。緩沖能力細(xì)胞培養(yǎng)基應(yīng)具有一定的緩沖能力。細(xì)胞培養(yǎng)過程中造成細(xì)胞培養(yǎng)液pH波動(dòng)的主要物質(zhì)是細(xì)胞代謝產(chǎn)生的CO2。在封閉式培養(yǎng)過程中CO2與水結(jié)合產(chǎn)生碳酸,細(xì)胞培養(yǎng)液pH很快下降;打開培養(yǎng)器具時(shí)CO2逸出則會(huì)引起pH升高。細(xì)胞培養(yǎng)基通常采用NaHCO3-CO2緩沖系統(tǒng),按下列化學(xué)反應(yīng)方程式調(diào)節(jié)細(xì)胞培養(yǎng)基的pH值:H2O+CO2→H2CO3H++HCO3-NaHCO3Na++HCO3-此外,還有緩沖能力較高的磷酸鹽緩沖系統(tǒng)。但碳酸鹽緩沖系統(tǒng)的細(xì)胞毒性小、成本低,在細(xì)胞培養(yǎng)中應(yīng)用得更為***。另一種較為常用的緩沖液是HEPES(羥乙基哌嗪乙硫磺酸)液,它是一種非離子兩性緩沖液,在pH~。高濃度的HEPES可能對(duì)細(xì)胞**性作用,細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)HEPES的添加濃度一般為10~25mmol/L。滲透壓細(xì)胞必須生活在等滲的環(huán)境中,大多數(shù)體外培養(yǎng)的細(xì)胞對(duì)滲透壓有一定耐受性。研究顯示。中國(guó)香港DMEM/F12培養(yǎng)基包括什么無(wú)血清培養(yǎng)基適用于需要無(wú)血清環(huán)境的細(xì)胞。
培養(yǎng)實(shí)例7和對(duì)比培養(yǎng)例7的誘導(dǎo)結(jié)果比較::用上述方法進(jìn)行水稻成熟胚愈傷**誘導(dǎo)時(shí),cs誘導(dǎo)培養(yǎng)基與ms誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)出的愈傷**形態(tài)大小均相近,出愈率均為100%。如圖7所示。培養(yǎng)實(shí)例8:液體培養(yǎng)基在植物水培中的應(yīng)用(1)用不同ph的超純水配制的液體培養(yǎng)基ph值穩(wěn)定性比較:a、用不同ph的超純水配制液體培養(yǎng)基:通常多種因素會(huì)導(dǎo)致相同超純水制水機(jī)產(chǎn)出的超純水ph變動(dòng)較大,ph通常為。分別選取ph為、、、、、,分別配制ms液體培養(yǎng)基、cs液體培養(yǎng)基、1/2ms液體培養(yǎng)基、1/2cs液體培養(yǎng)基,制作方法為:ms液體培養(yǎng)基為取ms基本培養(yǎng)基置于不同ph的超純水中溶解并定容至1l;cs液體培養(yǎng)基為取cs基本培養(yǎng)基置于不同ph的超純水中溶解并定容至1l;1/2ms液體培養(yǎng)基為取1/2ms基本培養(yǎng)基置于不同ph的超純水中溶解并定容至1l;1/2cs液體培養(yǎng)基為取1/2cs基本培養(yǎng)基置于不同ph的超純水中溶解并定容至1l。b、結(jié)果為:用ph為,ms液體培養(yǎng)基ph為,cs液體培養(yǎng)基ph為,1/2ms液體培養(yǎng)基ph為,1/2cs液體培養(yǎng)基ph為。植物**適宜生長(zhǎng)的ph一般為,觀察可知,ms液體培養(yǎng)基及1/2ms液體培養(yǎng)基的ph偏酸性且波動(dòng)較大,其應(yīng)用于液體培養(yǎng)基時(shí)通常需要調(diào)節(jié)ph,過程繁瑣,相比之下。
留點(diǎn)溫度計(jì)標(biāo)化合格后方可用于驗(yàn)證試驗(yàn)。檢測(cè)前,需將溫度計(jì)的**柱甩至40℃以下。每次監(jiān)測(cè)后留點(diǎn)溫度計(jì)的溫差應(yīng)存l℃之間,則說明**器內(nèi)的溫度分布是均勻的。**后的菌片應(yīng)在嚴(yán)格無(wú)菌操作條件下放入**后的溴甲酚紫胨水培養(yǎng)基內(nèi)56-60℃培養(yǎng)24-48小時(shí),觀察顏色變化。如培養(yǎng)基變?yōu)辄S色,說明菌片中的嗜熱脂肪芽胞桿菌尚未完全滅活,**仍可在培養(yǎng)基中生長(zhǎng),分解葡萄糖產(chǎn)酸變?yōu)辄S色。如培養(yǎng)基顏色不變化仍為紫色,則說明芽胞已滅活。同時(shí)要用未經(jīng)**的紙片放入培養(yǎng)基內(nèi)作為陽(yáng)性對(duì)照,不加紙片的空白培養(yǎng)基作為陰性對(duì)照;瘜W(xué)指示卡上的指示色塊,在高壓蒸氣**時(shí),由淡黃色變?yōu)楹谏。隨著顏色變化的深淺,并與對(duì)照色相比,可判斷**效果是否達(dá)到要求;瘜W(xué)指示卡應(yīng)在干燥處保存。遇潮會(huì)變色,影響**效果的觀測(cè)。高壓蒸氣**必須使蒸氣順利進(jìn)入**器內(nèi),與**物品接觸,并將原有的冷空氣排出方可達(dá)到**的效果。要進(jìn)行空載熱分布和滿載熱穿透力驗(yàn)證(滿載時(shí)不超過總體積的2/3)。二種驗(yàn)證各重復(fù)三次,共做六次。5個(gè)點(diǎn)六次試驗(yàn)表明溫度均在121℃,化學(xué)指示卡變黑;程度與對(duì)照色一致;培養(yǎng)基均未改變顏色,說明高壓蒸氣**效果合格。高壓**器屬于強(qiáng)檢儀器,但強(qiáng)檢只是對(duì)儀器物理參數(shù)的考核。無(wú)血清培養(yǎng)基適合于無(wú)血清環(huán)境的細(xì)胞培養(yǎng)。
這些重組蛋白和動(dòng)物來源成分對(duì)生物制品的安全性有很大影響。成本低。主要用途應(yīng)用案例采用199(SLM)、MEM(SLM)和DMEM(SLM)低血清培養(yǎng)基分別培養(yǎng)Vero細(xì)胞、BHK21細(xì)胞和CHO細(xì)胞,新生牛血清用量可以從10%降至3%,減少新生牛血清使用批次和批間差的影響,減少生物制品純化損失,減少由于不確定蛋白或者其它血清組分帶來干擾和差異的風(fēng)險(xiǎn),提高制品安全性。低血清培養(yǎng)基可以在方瓶、3L轉(zhuǎn)瓶、15L轉(zhuǎn)瓶及生物反應(yīng)器中培養(yǎng)細(xì)胞,在*苗生產(chǎn)中可以達(dá)到低血清高密度的培養(yǎng)效果。低血清培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)成分優(yōu)于基礎(chǔ)培養(yǎng)基,易使細(xì)胞增殖迅速,代謝旺盛,代謝產(chǎn)物對(duì)細(xì)胞有不良影響,易產(chǎn)生細(xì)胞老化脫落現(xiàn)象。因此需要適當(dāng)增加換液次數(shù),增加傳代頻率。獲取同樣的細(xì)胞量,用低血清培養(yǎng)基將比用傳統(tǒng)培養(yǎng)基縮短近1/3的時(shí)間,可提高生產(chǎn)效率。采用199(SLM)低血清培養(yǎng)基培養(yǎng)Vero細(xì)胞分泌狂犬*苗病毒,滴度明顯高于采用199培養(yǎng)基傳統(tǒng)培養(yǎng)獲得的滴度。采MEM(SLM)低血清培養(yǎng)基BHK21細(xì)胞,在本實(shí)驗(yàn)情況下12代內(nèi)細(xì)胞形態(tài)和致密度均優(yōu)于MEM培養(yǎng)基傳統(tǒng)培養(yǎng)情況,因而可以預(yù)期其產(chǎn)生的口蹄*、甲肝等*苗生產(chǎn)的病毒產(chǎn)量將提高。低血清培養(yǎng)基用于反應(yīng)器Vero細(xì)胞狂犬*苗的生產(chǎn),實(shí)踐證明效果良好。采DMEM。MEM培養(yǎng)基在藥物篩選中有重要作用。福建F12培養(yǎng)基包括
F12培養(yǎng)基適用于神經(jīng)細(xì)胞和其他敏感細(xì)胞系。福建F12培養(yǎng)基包括
生產(chǎn)上一般采用冷水噴淋冷卻,冷卻到40-50℃后,輸送到預(yù)先已經(jīng)**過的罐內(nèi)。(四)、間歇**與連續(xù)**的比較1、歇**的***和缺點(diǎn)***是設(shè)備要求低,不需另外設(shè)置加熱、冷卻裝置;操作要求低,適于手動(dòng)操作,適合于小批量生產(chǎn)規(guī)模;適合于含有大量固體物質(zhì)的培養(yǎng)基的**。缺點(diǎn)是培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)損失較多,**后培養(yǎng)基的質(zhì)量下降;需進(jìn)行反復(fù)的加熱和冷卻,能耗較高;不適合于大規(guī)模生產(chǎn)過程的**;發(fā)酵罐的利用率較低。2、連續(xù)**的***和缺點(diǎn)***是**溫度高,可減少培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的損失;操作條件恒定,**質(zhì)量穩(wěn)定;易于實(shí)現(xiàn)管道化和自控操作;避免了復(fù)的加熱和冷卻,提高了熱的利用率;發(fā)酵設(shè)備利用率高。缺點(diǎn)是對(duì)設(shè)備的要求高,需另外設(shè)置加熱、冷卻裝置;操作較麻煩;染菌的機(jī)會(huì)較多;不適合于含大量固體物料的**;對(duì)蒸汽的要求高。由此可見,無(wú)論在理論上或者在實(shí)踐上,與間歇**過程相比,連續(xù)**的***十分明顯。因此,連續(xù)**越來越多地被用培養(yǎng)基的**。福建F12培養(yǎng)基包括